NED373389NED

Вопросы биотехнологии 405 Целью нашего исследования являлся подбор оптимальных ме- тодов и условий концентрирования и очистки вируса чумы плото- ядных (ЧП) штамма «Рокборн». Материалы и методы Для получения очищенного и концентрированного антигена мы использовали в наших исследованиях химические методы. На основании анализа данных литературы по очистке и концентриро- ванию РНК-содержащих вирусов (2, 3, 4, 5) и собственного опы- та работы с возбудителем ЧП были отобраны следующие методы: осаждение вируса полиэтиленгликолем (ПЭГ), осаждение вируса ПЭГ с последующей очисткой хлороформом и осаждение вируса ПЭГ с последующей очисткой полиэтиленимином (ПЭИ). Для концентрирования использовали ПЭГ-6000 в виде 50% стерильного раствора. Очистку вируссодержащей суспензии, для освобождения от чужеродных белков, проводили в первом слу- чае с использованием хлороформа, во втором - с использованием 10%-ого раствора полиэтиленимина. В своей работе мы использовали вирус ЧП штамм «Рокборн», выращенный на культуре клеток (к/кл) Vero. Контролем служила незараженная клеточная культура Vero. Вируссодержащую суспензию сначала осветляли низкоскорост- ным центрифугированием при 1000 об/мин в течение получаса, на- досадок отбирали (элюат 1), а осадок ресуспендировали в фосфатно- буферном растворе до конечного объема суспензии, равного 1,25% объема исходного вируссодержащего материала (6). Для высвобож- дения оставшегося вируса из клеток проводили 3-кратное замора- живание–оттаивание осадка, после чего его центрифугировали при 1000 об/мин. Надосадок (элюат 2) смешивали с элюатом 1, а осадок (клеточный детрит) ресуспендировали в фосфатно-буферном рас- творе и использовали для опыта. В полученную смесь добавляли ПЭГ-6000 до конечной концентрации 8% и 0,15 М раствор NaCl, а затем суспензию инкубировали при 4 0 С в течение 12 ч. После осаж- дения вируса ПЭГ вируссодержащую суспензию повторно центри- фугировали при 3000 об/мин в течение 1 ч, надосадочную жидкость удаляли, а осадок ресуспендировали в фосфатно-буферном растворе до конечного объема суспензии, равного 1,25% исходного объема. Электронная Научная СельскоХ зяйственная Библиотека