NED373389NED

Вопросы биотехнологии 389 поместили их для культивирования в термальную комнату. Через 48 ч провели микроскопирование и отобрали сосуды с полным монослоем. Согласно планируемой модификации одновременно вносили в сосуды вирус в виде вируссодержащей суспензии для заражения и свежетрипсинизированные клетки КФ в концентра- циях 300 ± 50 и 600 ± 50 тыс/мл в объеме 100 ± 10 мл, которые были изготовлены по общепринятой методике с использованием 11-12-суточных СПФ-эмбрионов. После этих манипуляций сосу- ды вновь поместили в роллерные установки для культивирования. Ежедневно сосуды просматривали под микроскопом и оценивали качество монослоя. Через 24 ч обнаружили, что свежевнесенные клетки КФ прикрепились к основному монослою и начали расти, формируя полислой. Через 48 ч по всему монослою появились ци- топатические изменения под действием вируса герпеса индеек в виде бляшек, которые занимали около 70% площади. Вируссодер- жащие клетки сняли со стекла по отработанной нами методике (3). После завершения всех манипуляций с клеточной суспензией были взяты пробы для определения клеточной концентрации и инфекционной активности вируса. При этом оказалось, что концентрация клеток и инфекционная активность вируса при модифицированном методе почти в 2 раза превосходит обычный способ культивирования. Результаты этих исследовании представлены в таблице. Таблица Результаты опыта по культивированию ВГИ штамма «Владимир» с использованием модификации (n=5) № Концентрация свеже- трипсинизированных внесенных клеток Конечная концентрация клеток, выраженная млн.кл/мл Инфекционная активность, выраженная в ФОЕ/мл 1 300 ± 50 тыс/мл 11,0-12,0 3,0±0,2х10 6 2 600 ± 50 тыс/мл 15,0-17,0 3,8±0,2х10 6 3 Контроль, без внесения клеток 8,5-10,0 1,2±0,3х10 6 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека