NED373389NED

388 Вопросы биотехнологии твор Хенкса и смесь растворов версена с трипсином (9:1), приго- товленных по общепринятой методике (3). Определение биологической активности вируса . Биологиче- скую активность клеточно-ассоциированного штамма «Владимир» ВГИ определяли путем титрования в первичной культуре клеток куриных фибробластов по отработанной нами методике. Для титрования клеточно-ассоциированного вируса использо- вали 24-30-часовую культуру клеток КФ. Вирус титровали в десяти- кратном разведении от 10 -1 до 10 -4 . Материалом каждого разведения заражали по 4 флакона с культурой путем внесения в поддержива- ющую среду по 0,5 мл соответствующего разведения суспензии ин- фицированных клеток в бессывороточной поддерживающей среде. На 5-7 сутки инокуляции вирусом клеточные культуры окрашива- ли амидовым черным и проводили учет фокусов цитопатического действия вируса. Титр выражали в фокусообразующих единицах (ФОЕ) в 1 мл и вычисляли по формуле: где, Т – титр вируса в ФОЕ/мл; А – среднее количество фокусов во флаконе; 2 – коэффициент пересчета в 1 мл; Р – разведение вируса О пределение концентрации клеток . Клетки подсчитывали в камере Горяева, для чего 1,0 мл тщательно перемешанной суспен- зии вакцины разводили питательной средой или физиологическим раствором в 10 раз и к 1,0 мл клеточной взвеси добавляли равный объем 0,2% раствора трипановой сини. Подсчитывали только клет- ки, имеющие ядро и неповрежденную цитоплазму. Затем определя- ли процентное содержание жизнеспособных клеток. Результаты исследований Для проведения запланированных работ провели трипси- низацию 11-12-суточных СПФ-эмбрионов кур по отработанной нами ранее методике. После определения посевной концентра- ции провели посев клеточной суспензии в роллерные сосуды и Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека