NED373389NED

Вопросы биотехнологии 387 Материалы и методы Вирусный материал . В работе был использован штамм «Вла- димир» вируса герпеса индеек (ВГИ). Биологическая активность исходного материала составила 1,2х10 6 ФОЕ/мл. Культура клеток . В работе использовали первичнотрипсини- зированные клетки куриных фибробластов СПФ – 11-12 - суточ- ных эмбрионов кур фирмы «Ломан Тирцухт ГмбХ» (Германия). Трипсинизацию тканей эмбрионов и приготовление клеточных культур проводили по общепринятым методикам, а также по ре- комендациям, разработанным в ФГУ «ВНИИЗЖ». Температуру инкубации нормальных и зараженных клеточных культур под- держивали от 37,5 0 С до 38,5 0 С. Сроки культивирования состав- ляли от 24 до 120 часов и зависели от целей работ, а также по- севной концентрации. Сосуды и аппараты . Промышленное и лабораторное культи- вирование клеток и вируса проводили в 3-литровых роллерных бутылях, диаметром 10 см. Для вращения использовали аппарат стеллажно-ярусного типа на 12 бутылей. Использовали принцип плавного вращения ростовой поверхности сосудов со скоростью вращения 8-12 об/ч. Для титрования вируса клетки выращивали во флаконах емкос- тью 50 мл фирмы Costar. Посевная концентрация клеток для флаконов составляла 0,5- 0,6 млн/мл, для роллерных сосудов - от 1,5 до 2,0 млн/мл, в зависи- мости от цели исследования. Сроки культивирования зависели от целей работ и посевной концентрации. Питательные среды и растворы . Основной средой для про- мышленного культивирования вирусов БМ и клеток куриных фибробластов была смесь равных объемов сред: 199, Игла и 0,5% гидролизата лактальбумина на солевом растворе Эрла (ГЛАЭ). Питательная ростовая среда содержала 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, поддерживающая питательная среда - 2- 5% сыворотки производства ВНИВИ г. Казань. Величина рН росто- вой и поддерживающей сред составляла 6,9 - 7,2. Для обработки и трипсинизации тканей эмбрионов, а также для дезагрегации клеточных культур, использовали рабочий рас- Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека