NED365343NED

60 свет не вырабатывается. На сегодня пиросеквенирование позволяет очень точно определять последовательности ДНК длиной до 30–40 п.н. Однако при секвенировании последовательности длиной более 30– 40 п.н. могут возникать ошибки, которые практически невозможно уст- ранить. Другой характеристикой этого метода может быть то, что он по- зволяет проводить секвенирование неизвестных полиморфных последо- вательностей (Garcia et al., 2000), включая мутации или другие измене- ния на нуклеотидном уровне. В случае если мутация известна (напри- мер, SNP), с помощью пиросеквенирования можно определять различия между вариантами аллелей (Ahmadian et al., 2000). Уникальность свойств пиросеквенирования при анализе на молекулярном уровне за- ключается в том, что каждая аллельная комбинация (гомо- и геторози- готы) дает специфичный образец или шаблон, который можно сравнить с двумя другими вариантами или шаблонами SNP аллельных комбина- ций. Наиболее часто встречающиеся изменения на молекулярном уровне — это SNP. В зависимости от биологического вида растений, полиморфизм на уровне единичного нуклеотида распространен по рас- тительному геному со средней частотой примерно 1 SNP на каждые 100–1300 п.н., в зависимости от вида растений (Rafalski, 2002b). Для то- го чтобы выявить SNP требуются высокоточные и очень чувствитель- ные методы с высоким разрешением. Как правило, эти методы основы- ваются на секвенировании генома организма. В дополнение к описан- ным выше методам секвенирования и определения SNP методы геноти- пирования или SNP-фингерпринтинга можно разделить на четыре груп- пы. Первая группа основывается на определении единичного нуклеоти- да в вариабельной позиции и обозначается как минисеквенирование или удлинение единичного нуклеотида (single base extension, SBE). Вторую группу образуют методы, которые позволяют различать последователь- ности посредством анализа лигирования олигонуклеотидов. Третью группу составляют методы, основанные на гибридизации коротких нук- леотидов и матричной ДНК. Последнюю, четвертую группу составляют методы SNP генотипирования, основанные на аллель-специфичной ам- плификации и выявлении различий с помощью ДНК-полимеразной ре- акции. Основные методы всех этих групп были описаны выше. Все вышесказанное свидетельствует о том, что сегодня существу- ет многообразие методов и подходов для анализа на молекулярном уровне генетического изменения и вариаций генотипов или, другими словами, проведения ДНК-фингерпринтинга. Все эти методы и подходы имеют свои достоинства и недостатки. Однако можно сказать, что при выявлении генетического полиморфизма на молекулярном уровне ме- тоды, основанные на электрофоретическом разделении и анализе, име-