NED365343NED

56 менение размеров фрагмента наблюдается нечасто. Как правило, спе- цифичный ПЦР-фрагмент, выявляемый RAPD анализом, либо присут- ствует (аллель А), либо отсутствует (аллель а). Такое распределение ал- лелей типично для доминантного маркера. Фрагмент виден в гомози- готном (АА) и в гетерозиготном (Аа) состоянии, а по отсутствию ПЦР- фрагмента можно утверждать о гомозиготном рецессивном (аа) состоя- нии генотипа. С другой стороны, в случае кодоминантных маркеров ге- терозиготное состояние (АА’) может отличаться от обоих гомозиготных состояний (АА и АА’). Williams et al. (1990) нашли, что не менее 95 % RAPD-фрагментов ведут себя как доминантные маркеры и не более 5 % проявляют кодоминантное наследование, то есть выявляются как два аллеля с различными размерами. Для многих исследований доминантный характер проявления RAPD-фрагментов является неблагоприятным фактором. Например, в популяционной генетике частота аллелей не может быть установлена, поскольку гомозигота (АА) не может быть разделена от гетерогизоты (Аа). То же самое можно сказать и в отношении расщепляющихся попу- ляций F 2 , используемых при молекулярном картировании генов. В этом случае теряется вся ценная информация. В то же время, доминантный характер RAPD-фрагментов не является проблемой в случае исследова- ния гаплоидных организмов. Для растений RAPD-маркер гетерозиготы (Аа) в случае мегагаметофита будет проявлять расщепление 1 : 1 для присутствия (А) или отсутствия (а) этого маркера, в то время как для гомозиготы RAPD-маркер проявится во всех мегагаметофитах. 3.8. Методы секвенирования Среди огромного числа методов анализа генетического разнооб- разия на молекулярном уровне секвенирование ДНК — наиболее акку- ратный метод по определению точечных и небольших по размерам му- таций или изменения позиций (замены) нуклеотидов. Секвенирование ДНК считается основным стандартом по определению или выявлению мутационных делеций и именно поэтому мутации, выявленные другими методами, должны быть подтверждены результатами одного из методов ДНК-секвенирования. Среди методов ДНК-секвенирования, прежде всего, следует отметить общепринятый, ставший уже классическим, ме- тод секвенирования по Sanger, который с успехом применяется уже на протяжении около 40 лет. С другой стороны, современные методиче- ские подходы ДНК-секвенирования такие, как секвенирование гибриди- зацией, масс-спектрометрия и пиросеквенирование, появившиеся в кон- це ХХ века, все больше и больше используются для выявления генети- ческой изменчивости между генотипами на уровне первичной нуклео- тидной последовательности ДНК.