NED365343NED

52 стрикции (первый этап) и/или сайтов гибридизации произвольных осно- ваний (второй и третий этапы). Из-за большого числа полиморфных полос, получаемых при про- ведении AFLP анализа, а также высокого качества профилей формируе- мых в полиакриламидном геле, AFLP чрезвычайно популярен как метод выявления генетического разнообразия в исследованиях объектов цар- ства растений. Этот подход был использован, например, при изучении популяционной генетики у ивы (Beismann et al., 1997), установлении ге- нетического разнообразия у кукурузы (Smith et al., 1993) и сои (Maughan et al., 1996b), создании генетических карт у ячменя (Becker et al., 1995), дыни (Wang et al., 1997) и свеклы (Schondelmaier et al., 1996), а также для идентификации маркера, тесно сцепленного с геном R1 , у картофеля (Meksem et al., 1995). На сегодня данный подход довольно часто ис- пользуют как один из источников маркеров для позиционного клониро- вания. Интересующие исследователя AFLP ампликоны можно преобра- зовать в полиморфные STS локус-специфичные кодоминантные марке- ры, удобные для генотипирования больших популяций. Полосы выре- зают из AFLP геля, выделяют из них ДНК, которую затем клонируют и секвенируют. На основе полученной информации о первичной нук- леотидной последовательности создают специфичные ПЦР праймеры, а остальные процедуры молекулярного анализа — точно такие же, как и для любых других STS, включая возможность их использования в тех- нологиях SNP генотипирования (Meksem et al., 2001). Упомянутые выше микросателлиты или SSR (Simle Sequence Repeats) являются тандемными повторами моно-, ди-, три- или тетра- нуклеотидных коровых единиц. В качестве коровых наиболее часто встречаются (A) n , (TC) n , (TAT) n , (GATA) n мотивы и т. д., при этом зна- чение n варьирует от нескольких единиц до нескольких десятков единиц. Такие структуры являются очень распространенными у эукариот (Toth et al., 2000). Для высших растений установлено, что у них в среднем один динуклеотидный SSR может встречаться каждые 30–100 т.п.о. Схожая плотность отмечается и для три-, а также тетрануклеотидов (Mogrante, Olivieri, 1993). В дополнение к их распространению по всему геному, высокий уровень полиморфизма является особенностью микро- сателлитов, что делает SSR очень полезным инструментом для приме- нения в генетике и селекции (рис. 3.7). Так, например, в группе пример- но из 100 генотипов сои было обнаружено до 26 аллелей SSR (Rongwen et al., 1995), что позволило с большой точностью провести идентифика- цию изученных образцов.