NED365343NED

40 Рис. 3.3. Схема проведения RFLP анализа на основе метода блот-гибридизации по Саузерну (Southern, 1975). После выделения из различных генотипов геномной ДНК, она подвергается гидро- литическому расщеплению эндонуклеазами. Места расщепления указаны на схеме сплошными черными стрелками. На приведенной схеме ДНК генотипа Б, в отличие от ДНК генотипа А, содержит не три, а два сайта для расщепления гидролитически- ми эндонуклеазами. Сплошной короткой крапчатой линией обозначена проба — фрагмент ДНК, гомологичный участку геномной ДНК генотипо в А и Б (по Ю.В. Чеснокову, 2007). они слишком многочисленны, и это является причиной «размазывания» окрашенной детектируемой нуклеиновой кислоты по электрофоретиче- ской дорожке. Но, даже если осуществить визуализацию рестрициро- ванной ДНК специфичным прокрашиванием, проблема локализации и идентификации гомологичных фрагментов остается нерешенной. Вы- ражаясь в генетических терминах, вопрос, каким образом можно разли- чить аллельные фрагменты от не аллельных, остается открытым. Реше- ние этой проблемы кроется в использовании молекулярных проб. Молекулярные пробы (иногда их называют зонды) — это неболь- шие фрагменты (обычно от 0,5 т.п.о. до 3 т.п.о.) ДНК или РНК, которые могут быть использованы для выявления (нахождения) искомой или специфичной нуклеотидной последовательности среди гетерогенной смеси фрагментов нуклеиновых кислот или в тотальной ДНК. Такое Генотип Б Генотип А Генотипы А Б Генотипы А Б ДНК, пере- несенная на мембрану Радио– автограф Расщепление ДНК гидролитическими эндонуклеазами Проведение гель- электрофореза и перенос ДНК на мембрану Гибри- дизация с мече- ной про- бой