NED365343NED

37 обладать, например, плейотропным эффектом); (6) быть «нейтральным», замена аллелей в маркерном локусе не должна иметь фенотипического или селективного эффекта (полиморфизм на молекулярном уровне ДНК почти всегда нейтрален); (7) оставаться нечувствительным к воздейст- вию окружающей среды, что должно проявляться в корреляции фено- типа и проявлении маркера или маркерного признака, вне зависимости от воздействия окружающей среды; (8) быть доступным для его исполь- зования (например, легко амплифицируемым и выделяемым, либо быть доступным для свободной купли/продажи); (9) давать высокую воспро- изводимость результатов; (10) быть легким и удобным для проведения анализа (например, позволяющим проводить анализ автоматически); (11) позволять легко обмениваться воспроизводимыми результатами между лабораториями. К сожалению, на сегодня нет ни одного молеку- лярно-генетического маркера отвечающего всем перечисленным выше критериям. Однако среди существующих маркеров и подходов можно выбрать оптимальные для достижения стоящих перед исследователем целей. Причем можно добиться такого комбинирования методов и мар- керов, при котором их совместное использование позволит полностью «перекрыть» все образующиеся нестыковки. 3.2. Определение хромосомных и других крупных геномных пере- строек Значительные геномные перестройки (более 1 × 10 6 пар нуклеоти- дов), такие как изменение числа хромосом или хромосомные трансло- кации, могут быть сравнительно легко определены с помощью методов цитогенетики. Чувствительность цитогенетического анализа можно по- высить использованием флуоресцентных методов анализа, таких как флуоресцентная гибридизация in situ (fluorescent in situ hybridization — FISH). FISH методология использует флуоресцентно-меченую ДНК- пробу, которая гибридизуется с определенным районом хромосомы, имеющим гомологию с ДНК, использующейся в виде пробы (Kornberg et al., 1992). Анализ фрагментов ДНК, основанный на гель- электрофоретическом разделении районов или частей хромосом, полу- чивший название пульс-электрофорез, — совершенно другая техника, которая может быть использована для анализа и выявления как малень- ких, так и больших делеций и инсерций (Смит и др., 1990). Анализ же небольших (как правило, от нескольких десятков до нескольких тысяч пар нуклеотидов) фрагментов ДНК обычно включает использование ре- стрикционных ферментов-экзонуклеаз и/или микросателлитов для вы- явления различий между генетическими вариантами генотипов.