NED365343NED

36 реакции (ПЦР). Некоторые вновь появившиеся и модифицированные старые методические подходы по-прежнему называются ДНК- фингерпринтингом, но появились и другие названия, такие, например, как ДНК-профайлинг (DNA profiling), которые указывают на специфич- ные методологические особенности того или иного примененного под- хода по ДНК-фингерпринтингу. Но, так или иначе, мультилокусный подход с визуализацией полиморфизма ДНК, как и ДНК- фингерпринтинг, основывается либо на молекулярной гибридизации фрагментов ДНК, либо на изучении полиморфизма с помощью ПЦР ре- акции. Согласно этому определению, ДНК-фингерпринтинг включает в себя две основные стратегические разновидности: (1) «Классический» фингерпринтинг, основанный на ДНК-гибридизации, включающей гид- ролитическое расщепление геномной ДНК ферментами- эндонуклеазами; электрофоретическое разделение полученных ДНК- фрагментов по их молекулярной массе и размерам; и, наконец, опреде- ление проявления молекулярного мультилокусного полиморфизма, по- средством гибридизации ДНК-фрагментов с комплементарной последо- вательностью ДНК, так называемой «пробой» или «зондом»; (2) ДНК- фингерпринтинг, основанный на ПЦР, который заключается в in vitro амплификации специфичных ДНК-последовательностей с помощью специфичных или неспецифичных олигонуклеотидов («праймеров» — «primers») и термостабильной ДНК-полимеразы; электрофоретическом разделении амплифицированных фрагментов и определении молеку- лярного полиморфизма, посредством различных методов окрашивания полученных ампликонов ДНК. Обе стратегии претерпевали и претерпе- вают разнообразные технические модификации, изменения праймеров и проб, которые используются в исследованиях, поэтому совершенно необходимо определить основные свойства, которыми должны обладать, так называемые, молекулярные или, если быть более точным, молеку- лярно-генетические маркеры. Как правило, молекулярно-генетический маркер должен обладать следующими свойствами: (1) быть высоко по- лиморфным; (2) обладать кодоминантным наследованием (что позволя- ло бы выявлять гомо- и гетерозиготное состояние у диплоидных орга- низмов); (3) быть неэпистатичным, что означает, что проявление марке- ра индивидуального генотипа может быть выявлено визуально, незави- симо от месторасположения выбранного маркера в геноме индивидуума (кодоминирование и неэпистатическое проявление признака могут быть определены как отсутствие внутри- и межлокусного взаимодействия, соответственно); (4) относительно часто встречаться в геноме иссле- дуемого генотипа и быть мультиаллельным, благодаря этому увеличи- вается частота и спектр полиморфности; (5) обладать равномерным рас- пределением по геному и селективно нейтральным поведением (т. е. не