NED359428NED

ными изменениями также для получения культур кле­ ток другого вида. М е т о д и к а в ы п о л н е н и я 1. Поверхность почки протереть дважды спиртом, обжечь, разрезать капсулу, вырезать из коры почки небольшие куски (около 4 г) и поместить в посуду емкостью 100. мл. 2. Один раз промыть ткань раствором PBS, затем раз­ резать ее на кусочки диаметром 0,5 см острыми, во избежание размозжения тканей, ножницами и опять дважды промыть раствором PBS, сливая жидкость. 3. Поместить ткань в колбу с металлическим магнит­ ным стержнем, залить 10 мл подогретого трипсина, поместить ,на 10 мин в водяную баню (37 °С) на электромагнитную мешалку. В результате фермен­ тативного и механического воздействия происходит высвобождение клеток из тканевых фрагментов. Полезно использовать специальные колбы, имеющие в нижней части стенок углубления, благодаря ко­ торым вращающийся стержень более энергично раз­ бивает о них ткань. При отсутствии электромаг­ нитной мешалки высвобождения клеток можно до­ биться встряхиванием колбочки, помещенной в водяную баню, вручную. 4. Через 10 мин эту первую клеточную взвесь слить . и выбросить (содержит токсические вещества). 5. Повторно залить ткань 10 мл подогретого трипсина и через 10 мин взвесь клеток слить в сосуд, поме­ щенный в лед, с целью остановить дальнейшее дей­ ствие ферментов; удобно при этом использовать колбы с поперечными углублениями около горла, в которых задерживается ткань при сливании жид­ кости. При использовании обычной колбы не­ обходимо придерживать ткань стеклянной па­ лочкой. 6. Ткань залить новой порцией подогретого трипсина, после чего описанные выше манипуляции можно повторять до получения необходимого количества клеток. Высвобождение клеток может также про­ исходить непрерывно при использовании сооответ- ствующей системы (рис. 11). 7. По окончании трвпсинизации взвесь клеток, собран­ ную в сосуд, охлажденный льдом, фильтруют через несколько слоев марли, помещенной в воронку и в 96 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека