NED359428NED

г) проба на неспецифический лнале сенсибилизированных эритроци­ тов барана: 0,3 мл вероналавого буфера д) проверка комплемента: 0,1 мл неразведеяного вируса в каждую лз четырех лунок 0,1 мл вероналавого буфера в каждую лунку 0,1 мл комплемента, соответственно разведенного в буфере в очередные лунки в последовательности: 1) нервзведенный (2 МГД) 2) разведенный 1:1,33 (1,5 МГД) 3) разведенный 1 : 2 ( 1 МГД) 4) разведенный 1 :4 (0,5 М ГД), 8. Накрыть пластинку с разлитыми реагентами дру­ гой, перевернутой, и оставить до следующего дня при 4°С в целях осуществления реакции связывания комплемента. 9. На следующий день поместить Пластины с реаген­ тами на 30 мин в термостат при 37 °С, а охлажден­ ные в течение ночи сенсибилизированные эритроци­ ты — на водяную баню также при 37 °С. 10. Добавить во все лунки по 0,1 мл сенсибилизирован­ ных эритроцитов. 11. Поместить пластину на 30 мин в термостат при 37 °С, слегка перемешивая содержимое лунок перед инку­ бацией, а затем каждые 15 мин. 12. Вынуть пластину из термостата и приступить к оцен­ ке результатов. Полное связывание комплемента (отсутствие лизиса эритроцитов) обозначается как «4» (или + + + + ) , от­ сутствие связывания — как «0». Промежуточные степени связывания комплемента обозначаются цифрами «3», «2», «1», что соответственно означает лизис 25%, 50 и 75% эритроцитов. Пример реакции связывания компле­ мента представлен в таблице 1, в которой все контроли оказались отрицательными. Самое высокое разведение, дающее результат «3» или «4», обозначает границу спо­ собности неизвестного (исследуемого) вируса связывать комплемент. Разведение это обозначает титр исходного вируса перед добавлением дальнейших компонентов. В приведенном примере связывание комплемента насту­ пило при наивысшем разведении 1: 8. Это позволяет идентифицировать вирус окончательно или определить его групповую принадлежность, если сыворотка содер­ ж ала антитела для группы вирусов, имеющих общие антигены (например, практически все аденовирусы че- ловека и животных имеют общий групповой антиген). Электронная Научн я СельскоХозяйстве ная Библиотека