NED359428NED

пользуют или 95%-ный спирт в течение 30 мин или ацетон в течение 10 мин. 2. Препараты высушивают на воздухе, нанося 2—3 кап­ ли пероксидазного конъюгата (антитела, меченные пероксидазой) и помещают во влажную камеру при 37 °С на 30 мин (иногда лучше продлить это время до 1—2 ч или в случае инкубации при 4°С до 12 ч). 3. Препарат промывают трижды по 10 мин в PBS и один раз в течение 5 мин в дистиллированной воде, затем высушивают на воздухе. 4. Наносят на препарат несколько капель бензидиново- го индикатора для обнаружения пероксидазы. 5. Спустя 5— 10 мин препарат промывают в PBS, за­ ключают и просматривают под обычным микроско­ пом. Бензидиновый индикатор состоит из четырех раство­ ров: I. Насыщенный водный раствор бензидина. 50 мг бензидина рас­ творяют в 200 мл дистиллированной воды при температуре 80 °С; после охлаждения фильтруют. II. Раствор 3%-ного НаОг. III. Насыщенный растаор хлористого аммония. 40 г хлористого ам­ мония растворяют в 100 мл горячей дистиллированной воды и охлаждают. IV. Раствор ЭДТА. 5 мг ЭДТА растворяют в 100 мл горячей воды, доводят pH до 6,0 (с помощью NaOH). Индикатор приготовляют путем смешивания 1 мл раствора хлористого аммония с 1 мл раствора ЭДТА, 9 мл раствора бензидина и одной каплей перекиси во­ дорода. Суть действия индикатора состоит в окислении бен­ зидина в присутствии пероксидазы и перекиси водорода. Возникающий продукт реакции — осадок окисленного бензидина — имеет голубовато-коричневый цвет и ви­ ден под обычным микроскопом. Обнаружение вирусных антигенов в мазках и гисто­ логических срезах проводится тем же способом. Однако время инкубации с конъюгатом при исследовании сре­ зов нужно продлить до 20 ч при температуре 4°С или до 6 ч при температуре 37 °С. Второй способ (их существует несколько) постанов­ ки иммунопероксидазной реакции при использовании другого реактива для идентификации пероксидазы за­ ключается в следующем: Пункты с 1-го по 5-й — как описано выше. 37 Электронная Научная Сельск Хозяйственная Библиотека