NED359428NED

При прямом методе (а): За. На препарат наносят конъюгат и окрашивают в те­ чение соответствующего времени при соответствую­ щей температуре — эти условия определяются экспе­ риментально. Обычно окрашивание проводится в те­ чение 20—60 мин при температуре 37 °С во влажной камере, хотя некоторые исследователи предпочи­ тают проводить эту процедуру при 4°С, удлиняя время окрашивания. 4а. Препарат отмывают в 0,01М PBS (забуференный фосфатами физиологический раствор) с pH 7,5 для удаления несвязанного с антигеном конъюгата. Применяют разные способы промывания препарата— от одноразового погружения в PBS до многократных смен PBS через каждые 30 мин. Это обусловлено прежде всего толщиной препарата, концентрацией краски и количеством PBS, взятым на одно промы­ вание. 5а. На препарат наносят раствор забуференного глице­ рина (90% глицерина и 10% PBS с pH 7,5) и при­ крывают стеклом. При просмотре под иммерсией рекомендуется использовать нелюминесцирующее масло. При непрямом методе (б): 36. На фиксированный препарат (как описано выше) наносят немеченные антитела (гамма-глобулины) против данного вируса, после чего препарат в тече­ ние 30 мин держат при температуре 37 °С. 46. Отмывают несвязанные антитела. 56. На препарат наносят конъюгат, содержащий анти­ тела против гамма-глобулинов того вида животных, на которых получали антивирусные антитела (см. 36), т. е. если в пункте 36 использовали антитела, полученные на курах, то в пункте 56 применяют ме­ ченые флюорохромом антитела против глобулинов кур. Время окрашивания этим конъюгатом такое же, как и при прямом методе. 66. Препарат отмывают для удаления несвязанных ме­ ченых антител, наносят забуференный глицерин, прикрывают стеклом и исследуют под люминесцент­ ным микроскопом. Положительный результат реакции в обоих случаях выражается свечением тех участков препарата, где имеется связанный конъюгат. 3* 35 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека