NED359428NED

стеклах. Препараты должны быть по возможности тон­ кими, в противном случае исследование и оценка спе­ цифической флюоресценции будут затруднены. Из под­ челюстных слюнных желез приготовляют препараты- мазки, беря материал не менее чем из шести разных участков железы, так как распределение в ней вируса неравномерно. Часто, чтобы получить отпечаток, прихо­ дится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала. Материал, присланный в лабораторию в глицерине, тщательно отмывают. Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в ацетоне, охлажденном до —20 °С, в течение 10—60 мин или проведя 3 раза над пламенем горелки. Для окра­ шивания наносят на препарат конъюгат в рабочем раз­ ведении. Время окрашивания при 37 °С во влажной ка­ мере — 30 мин. Затем конъюгат сливают, препарат промывают в PBS 2 раза по 5 мин и споласкивают ди­ стиллированной водой. После высушивания препараты опускают в забуфе- ренный глицерин (9 частей глицерина + 1 часть фос­ фатного буфера) и исследуют под люминесцентным ми­ кроскопом. Антиген вируса бешенства выявляется в препаратах из мозга в виде светло-зеленых флюоресци­ рующих частиц разной величины — от самых мелких до имеющих диаметр 20 мк, в препаратах же из слюн­ ных желез скопления антигена достигают размера 6— 8 мк. Форма крупных частиц может быть довольно раз­ нообразной, однако чаще они округлые или овальные. Большинство из них дает однородную флюоресценцию, у некоторых же флюоресценция более интенсивна по краям. Внутренних же флюоресцирующих телец не обнаружено. Дифференцирование ярко-зеленой флуорес­ ценции антигена вируса бешенства от других неспеци­ фических цветных эффектов в целом не представляет трудностей. Последние имеют вид ярко светящихся желтых, коричневых или белых очагов аутофлюорес­ ценции неправильной формы. Иногда, однако, выявля­ ется тоже ярко-зеленая неспецифическая флюоресцен­ ция В' результате окрашивания конъюгатом шарообраз­ ных и палочкообразных бактерий, а также других не- индентифицированных частиц. Специфичность выявленной флюоресценции прове­ ряют введением соответствующих контролей (постанов- 309 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека