NED359428NED

Заражение культуры клеток. Используют культуры клеток почки или семенников телят, которые зараж а­ ют после удаления ростовой среды, чтобы облегчить адсорбцию вируса из исследуемого материала. Пробы слизи, предназначенные для исследования, быстро размораживают и центрифугируют при малых оборо­ тах только для осаждения грубых частиц. При более высокой скорости вращения в осадок выпадает большое количество частиц вируса вместе со слизью. Первые цитопатические изменения в культурах мож­ но наблюдать иногда уже спустя 36 ч после инокуляции. Период наблюдения длится 5 дней. Эти изменения за­ ключаются в появлении округлившихся клеток, сильнее преломляющих свет. В этот период подтверждением вирусного характера этих изменений может служить положительный результат гемадсорбции суспензии эри­ троцитов морской свинки. В дальнейшем цитопатиче­ ские изменения усугубляются, обнаруживаются синци­ тий, дегенерация клеток и распад монослоя. Следующим доказательством заражения является положительный результат гемагглютинации с эритроцитами морской свинки. При отрицательном результате заражения куль­ туры делают два слепых пассажа. Заражение куриных эм брионов. Несмотря на то, что Маршалл [107] доказал пригодность этого метода для изоляции вируса из материала, взятого из носовой по­ лости больных животных, он оказался, однако, менее чувствительным, чем метод заражения культуры клеток. Преимуществом его является то, что случайное присут­ ствие в исследуемом материале вируса ринотрахеита не мешает изоляции вируса парагриппа-3. При использо­ вании культуры клеток это может осложнить диагности­ ку, так как оба вируса дают цитопэтический эффект. Для заражения используют 14-дневные эмбрионы, которым вводят исследуемую суспензию в аллантоис­ ную полость. Затем яйца инкубируют в течение четырех дней при температуре 36 °С и собирают аллантоисную жидкость. На положительный результат указывает со­ держание в ней довольно больших количеств вируса, что можно обнаружить путем заражения культуры кле­ ток, однако она не дает реакции гемагглютинации с эри­ троцитами морской свинки, кур и крупного рогатого ско­ та. После трех пассажей путем заражения в аллантоис­ ную полость титр вируса нарастает и его можно уже 295 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека