NED359428NED
Заражение культуры клеток. Используют культуры клеток почки или семенников телят, которые зараж а ют после удаления ростовой среды, чтобы облегчить адсорбцию вируса из исследуемого материала. Пробы слизи, предназначенные для исследования, быстро размораживают и центрифугируют при малых оборо тах только для осаждения грубых частиц. При более высокой скорости вращения в осадок выпадает большое количество частиц вируса вместе со слизью. Первые цитопатические изменения в культурах мож но наблюдать иногда уже спустя 36 ч после инокуляции. Период наблюдения длится 5 дней. Эти изменения за ключаются в появлении округлившихся клеток, сильнее преломляющих свет. В этот период подтверждением вирусного характера этих изменений может служить положительный результат гемадсорбции суспензии эри троцитов морской свинки. В дальнейшем цитопатиче ские изменения усугубляются, обнаруживаются синци тий, дегенерация клеток и распад монослоя. Следующим доказательством заражения является положительный результат гемагглютинации с эритроцитами морской свинки. При отрицательном результате заражения куль туры делают два слепых пассажа. Заражение куриных эм брионов. Несмотря на то, что Маршалл [107] доказал пригодность этого метода для изоляции вируса из материала, взятого из носовой по лости больных животных, он оказался, однако, менее чувствительным, чем метод заражения культуры клеток. Преимуществом его является то, что случайное присут ствие в исследуемом материале вируса ринотрахеита не мешает изоляции вируса парагриппа-3. При использо вании культуры клеток это может осложнить диагности ку, так как оба вируса дают цитопэтический эффект. Для заражения используют 14-дневные эмбрионы, которым вводят исследуемую суспензию в аллантоис ную полость. Затем яйца инкубируют в течение четырех дней при температуре 36 °С и собирают аллантоисную жидкость. На положительный результат указывает со держание в ней довольно больших количеств вируса, что можно обнаружить путем заражения культуры кле ток, однако она не дает реакции гемагглютинации с эри троцитами морской свинки, кур и крупного рогатого ско та. После трех пассажей путем заражения в аллантоис ную полость титр вируса нарастает и его можно уже 295 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека
RkJQdWJsaXNoZXIy