NED359428NED

инфицирования куриных эмбрионов, если исследуемый материал состоит из живых клеток. При введении ма­ териала, не содержащего клеток, он дает худшие ре­ зультаты. Используют клеточные культуры почек цыплят или культуры фибробластов эмбрионов уток. Д ля изо­ ляции штаммов с низкой патогенностью (вакцинные штаммы) пригодны также культуры фибробластов ку­ риного эмбриона. Наилучшие результаты получают на культурах клеток, приготовленных из тканей цыплят с генетически обусловленной высокой восприимчивостью к заражению вирусом болезни Марека (об этом уже упоминалось выше). Культивирование клеток лучше всего проводить в чашках Петри и инкубировать в термостатах с подачей СО 2 для сохранения pH питательной среды 7,2—7,4. Д ля последующей идентификации вируса в реакции иммунофлюоресценции в чашки вкладывают покровные стекла. Способ заражения клеточных культур (они должны иметь сплошной монослой) зависит от исследуемого материала. Если это взвесь клеток, то ее добавляют в культуральную среду, оставляют на 12—24 ч, после че­ го питательную среду меняют. Бесклеточные материалы вводят прямо на отмытый слой клеток, инкубируют в течение 30 мин при 37 °С и затем заливают питательной средой. В зараженных культурах клеток вследствие действия вируса появляются бляшки, причем для их выявления не нужно применять специальные среды покрытия, так как вирус тесно связан с клетками и не переходит в культуральную жидкость. Иногда, однако, появляют­ ся вторичные бляшки, если культуры инкубируют в течение более 5 дней после появления первичных бляшек. За зараженными культурами клеток почек цыплят ведут наблюдение в течение 7— 10 дней, а за фибробла­ стами эмбрионов уток — в течение 10—14 дней. При ис­ следовании бесклеточных материалов появление бляшек наблюдается с опозданием на несколько дней. Имеются указания на то, что культивирование клеток при повы­ шенной температуре (38,5— 40 °С) оказывает положи­ тельное влияние на процесс образования бляшек. Бляшки очень мелкие и обнаруживаются только под микроскопом. Непатогенные штаммы вызывают более 272 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека