NED359428NED

венно для исследования или сохраняют при комнатной температуре в течение до трех дней. Приготовляют 0,7%-ный раствор агарозы (NBC Ohio) в 0,1 М PBS (pH 7,2) с 8% NaCl или в небуфе­ рированном 8%-ном растворе NaCl. Агарозу растворя­ ют и сохраняют при температуре 56 °С; к ней можно до­ бавить 0,01% мертиолата. К агарозе добавляют соответствующее количество прогретой при 56 °С положительной сыворотки. Сыво­ ротку для опыта титруют заранее, исследуя ее серийные разведения в отношении известного антигена. Обычно используют ее в разведении 1:10—1:25 в геле. После тщательного смешивания всех ингредиентов прогре­ той пипеткой разливают агарозу с сывороткой на пластины. После свертывания агарозы пластины используют непосредственно в опыте или сохраняют не более трех дней во влажной камере при комнатной температуре. От дистального конца каждого пера отрезают около 0,5 мм и при помощи пинцета осторожно помещают в агарозу. Обычно на одной пластине исследуют 8 перь­ ев от каждой птицы, но можно и 16 (от двух птиц). Необходимость размещения на пластине именно такого количества перьев связана с тем, что расстояние меж­ ду ними должно быть 6—8 мм. В каждой пластине до­ бавочно вырезают углубление диаметром 2 мм и напол­ няют его экстрактом контрольного положительного антигена, приготовленного из душек перьев инфициро­ ванных птиц. Пластины помещают во влажную камеру при ком­ натной температуре и просматривают их каждый час. При положительной реакции уже через 1—2 ч появля­ ются преципитационные кольца, однако окончательный результат учитывают на следующий день, предвари­ тельно удалив душки перьев. Реакция связывания комплемента при употреблении известной положительной сыворотки кроликов также позволяет обнаружить вирусные антигены в исследуе­ мом материале. Учитывая характер репродукции вируса болезни Марека (тесная связь с клеткой), обычно для исследо­ ваний на животных, куриных эмбрионах или культурах клеток, используют взвесь клеток исследуемого матери* ала или цельную кровь. Исключением является внекле- Электронная Научная СельскоХозяйственная Биб иотека