NED359428NED

Плазму, содержащую лейкоциты, разводят в 7— 10 объемах ростовой среды, обогащенной добавкой 30% сыворотки свиней. Хорошо зарекомендовала себя среда Игла в растворе Хенкса или среда 199. Добавляют так­ же антибиотики. Взвесь клеток разливают по пробиркам и инкубиру­ ют при 37 °С. Культура становится готовой для употреб­ ления через 1—2 дня. Если клетки культивируют более длительное время, то питательную среду в них меняют через 2 дня или позже в зависимости от pH среды. Модифицированную методику приготовления культу­ ры лейкоцитов с применением поливинилового спирта (7 мл на 50 мл крови) с целью ускорения рас­ слоения гепаринизированной крови и получения макси­ мального количества лейкоцитов описали Крюков и др. [116]. Клеточную культуру заражают, вводя 0,2 мл дефиб- ринированной крови больного животного, 20% взвеси селезенки или лимфатических узлов. Гемадсорбцию на­ блюдают через 24—48 ч, цитолиз и отслоение клеток от стекла — в течение следующих нескольких дней. При наблюдении феномена гемадсорбции следует легко встряхивать пробирки для перемещения лежащих на поверхности эритроцитов, что позволяет отличить их от клеток, фагоцитированных лейкоцитами. Учитывая результаты реакции, необходимо просмот­ реть контрольные пробирки с неинфицированными куль­ турами, так как известны случаи неспецифической ге- адсорбции. Желательно с целью контроля ввести в отдельные пробирки взвесь органов здоровых животных. Положительная реакция гемадсорбции является достоверным доказательством вирусной инфекции, от­ рицательная же не исключает инфекции (при концент­ рации вируса 104—105/мл в исследуемом материале ре­ акция гемадсорбции может быть отрицательной). В по­ следнем случае следует провести дальнейшие пассажи. Некоторые штаммы вируса не вызывают феномена гем­ адсорбции. Серологическая идентификация вирусов этой груп­ пы проводится для выявления отличий между изолиро­ ванными штаммами, так как существует несколько ти­ пов вируса. 254 Электронная Н учная СельскоХозяйственная Биб иотека