NED359428NED

11. Просматривают под микрбскоПом 500—1000 лимфб: цитов и подсчитывают количество лимфобластов в опыте и в контролях I и II. Последний контроль име­ ет целью выявление способности лимфоцитов иссле­ дуемого животного к трансформации под дейст­ вием неспецифического митогена, каким является фитогемагглютинии. Процент лимфобластов в пробе с антигеном служит мерой клеточного иммунитета. Вместо утомительного подсчета лимфоцитов под ми­ кроскопом применяется также определение бласттранс- формации на основании включения меченого тимидина. В этом случае начало исследования с пункта 1-го по 7-й остается неизменным. Дальнейшая процедура происходит следующим обра­ зом: 8а. Добавляют тимидин, меченный углеродом или три­ тием (2 микрокюри на 1 мл взвеси), по 2 пробирки на пробу без антигена, 2 на пробу с антигеном и 2 на пробу с фитогемагглютинином. Инкубируют при темпера­ туре 37 °С в течение 24 ч. 9а. Центрифугируют и дважды промывают осадок PBS. 10а. Осадок разводят в 1—2 мл 5%-ноЙ трихлоруксу- сной кислоты и оставляют на 10 мин. 11а. Центрифугируют и затем разводят осадок в 0,2 мл PBS. 12а. Добавляют 0,5 мл 10%-ной NaOH, взбалтывают и вливают 2,5 мл синциляционной жидкости. 13а. Определяют степень включения тимидина, указы­ вающего на стимуляцию трансформации в пробе и обоих контролях. Индекс стимуляции (ИС) высчитывают по формуле: и г КИМ в культуре клеток с антигеном м КИМ в культуре клеток без антигена * где КИМ — количество импульсов в минуту. Л и т е р а т у р а : [20J; [32J; [33J; [50J; f56]; [74J; [123]; [20Ц; Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека