NED359428NED

При исследбванйи мелких животных используют ме­ тоды, позволяющие поставить реакцию с меньшими объемами крови, например методы, пригодные для ис­ следования кур (Коттер и др. [215]). Реакция торможения миграции лейкоцитов требует строгой стандартизации и осторожной интерпретации, особенно учета возможного влияния MEF — субстанции, оказывающей действие, противоположное MIF, т. е. сти­ мулирующей миграцию. Эта субстанция, как и MIF, об­ разуется лимфоцитами. Более подробное рассмотрение этого вопроса и особенно адекватности данного теста клеточному иммунитету описано Лярским и др. [216]. Реакция бласттрансформации лимфоцитов Тест основан на трансформации в присутствии специ­ фического антигена Т-лимфоцитов, происходящих от иммунной особи, в лимфобласты. П о с т а н о в к а р е а к ц и и 1. Выполняют процедуры, описанные в пунктах 1—3 при постановке реакции торможения миграции мак­ рофагов. 2. Осадок промывают дважды PBS (центрифугирова­ ние при 150g в течение 10 мин). 3. Определяют число лимфоцитов в счетной камере. 4. Осадок разводят в среде Паркера с 20%-ной те­ лячьей сывороткой и антибиотиками таким образом, чтобы в 1 мл взвеси получить 1,2-106 лимфоцитов. 5. Разливают в 12 пробирок (не менее) по 2 мл взвеси. 6. Затем к четырем пробиркам добавляют по 0,15 (0,2) мл питательного раствора с вирусным антиге­ ном (контроль I), к последним четырем — по 0,15 (0,2) мл раствора фитогемагглютинина Р (контроль II) до конечной концентрации 0,01 мл на 1 мл взве­ си. 7. Инкубируют при температуре 37 °С в течение 72 ч. 8. Центрифугируют при 150 g в течение 10 мин, надоса- дочную жидкость сливают. 9. Осадок разводят 2—3 мл фиксатора (3 части мети­ лового спирта + 1 часть уксусной кислоты) и поме­ щают в холодильник на 10 мин. 10. Центрифугируют, из осадка приготовляют препара­ ты, красят по методу Гимза (5 мл красителя в 100 мл воды) в течение 15 минут. 220 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека