NED359428NED

вором Хенкса в объеме 150 мл. Смыв центрифугируют при температуре 4°С в течение 10 мин при 150 g, над- осадочную жидкость сливают, снова заливают раствором и снова центрифугируют, после чего приготовляют 10% - ную взвесь макрофагов в питательной среде. Так как MIF тормозит миграцию не только макро­ фагов, но и других форм лейкоцитов, для проведения реакции чаще используют лейкоциты периферической крови данной особи. Одна из модификаций теста, приме­ няемая в отделе вирусологии Государственного институ­ та гигиены в Варшаве, выполняется следующим образом. 1. 17 мл крови набирают в шприц, содержащий гепа­ рин в конечной концентрации 20 ед/мл крови, после чего содержимое шприца доводят до 20 мл 2% -ной метилцеллюлозой. Шприц кладут под углом 45° (ко­ нусом вверх), накрывают стерильной марлей и дер­ жат при температуре 37 °С в течение 1—2 ч для осаждения элементов крови. 2. На шприц надевают иглу (наиболее подходят иглы для люмбальных пункций), согнутую под углом не­ сколько больше 90°, и, держа шприц конусом кверху, легким нажимом на поршень выталкивают плазму и содержащиеся в ней лейкоциты крови в центри­ фужные пробирки. 3. Взвесь центрифугируют при 150 4. Если в осадке много эритроцитов, то для их лизиса туда добавляют 10 мл 0,85%-ного раствора NH4CI с pH 7,2 в грпс-буфере, после чего центрифугируют при 150 g в течение 10 мин. 5. Осадок дважды промывают (центрифугированием, как указано выше) раствором Игла или Паркера с добавлением 10%-ной инактивированной телячьей сыворотки и антибиотиков (200 ЕД пенициллина и 100 мкг стрептомицина на 1 мл). 6. Из осадка приготавливают взвесь в трехкратном объеме указанных выше питательных сред и напол­ няют ею не менее 8 капилляров. Конец каждого ка­ пилляра залепляют пластилином. 7. Капилляры центрифугируют при 150 g в течение 5 мин, после чего отрезают их на высоте 2,5—3,0 мм над пластилином и прикрепляют концом, залеплен­ ным пластилином, к стенке и дну камеры (рис. 19) по два в каждой камере. Процедуры, описанные в пунктах 6—8, выполняются по возможности быстрее, 218 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека