NED359428NED

вающее полный гемолиз, составляет одну минимальную гемолитическую дозу или одну единицу (1 МГЕ) комп­ лемента. В основной реакции используют 2 МГЕ. Если, например, при титровании полный гемолиз наблюдался при использовании комплемента в разведении 1 :100, то в основной РСК используют его в разведении 1:50. Исследуемые сыворотки не должны содержать при­ меси лизированных эритроцитов и не должны быть за­ грязнены бактериями. Реакцию связывания комплемента можно поставить в пробирках или на плексигласовых досках с углубле­ ниями (лунками) и даже капельным методом на по­ верхности стеклянных пластин. Учитывая высокую стои­ мость компонентов реакции, в частности некоторых ан­ тигенов, в последнее время начали во все возрастающей степени пользоваться микрометодами, которые обеспечи­ вают получение хороших результатов при большой эко­ номии ингредиентов реакции. П о с т а н о в к а Р С К (цит. по Хоскинсу [78]) 1. Накануне постановки реакции подготовляют разве­ дение гемолитической сыворотки в вероналовом бу­ фере, содержащем 2 гемолитические единицы в 1 мл, и сенсибилизируют ею равный объем 4%-ной суспен­ зии эритроцитов барана. Инкубируют эту смесь при температуре 4 °С до следующего дня. Можно также инкубировать при температуре 37 °С в течение одно­ го часа. 2. Отдельно приготовить разведение стандартного ан­ тигена и стандартной сыворотки в вероналовом бу­ фере. Оба эти раствора должны содержать 2 гемо­ литические единицы/0,1 мл. 3. Развести нормальный, неинфицированный, контроль­ ный антиген аналогично стандартному антигену. 4. Приготовить разведение комплемента в вероналовом буфере, содержащее 2 минимальные гемолитические дозы в 0,1 мл; сохранять при температуре 0—4°С до момента использования. 5. Приготовить разведение 1 :8 исследуемых сыворо­ ток в вероналовом буфере и инактивировать их в водяной бане при температуре 56 °С в течение 30 мин. После охлаждения приготовить их серийные двукратные разведения до 1 :256. После разведения сывороток все компоненты уже готовы для проведе­ ния основной РСК. Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека