NED359428NED

PBS). Ниже приведены соотношения вируса и раство­ ров для получения разведений в пределах 1 lg: 0,1 lg соответствует 1:1,2; 1 часть вируса+ 0,2 части PBS 0,2 » » 1:1,6; 1 » » + 0,6 » » 0,3 э » 1:2,0; 1 » » + 1,0 » » 0,4 » » 1:2,5; 1 » » + 1,5 » 1 0,5 » » 1:3,2;. 1 1 + 2,2 I » 0,6 » » 1:4,0; 1 » » + 3,0 » » 0,7 » » 1:5,0; 1 » » + 4,0 » 1 0,8 » » 1:6,3; 1 » + 5,3 I 1 0,9 » » 1:8,0; 1 » + 7,0 » » Если вирус при титровании имеет титр 10 ~8’3 LD 50 , а в реакции решили применить его в концентрации 1000 LD 50 , тогда готовят разведение вируссодержащего ма­ териала 10-6’3. В этом случае сначала делают разведе­ ние 10 -5, а затем одну его часть смешивают с одной частью PBS, получая таким путем требуемую концен­ трацию вируса 10 -5’3 (1000 LD50). Следовательно, для постановки реакции серонейтра- лизации необходимо знать инфекционный титр вируса. Определять его можно периодически, так как вирус, со­ храняющийся в замороженном состоянии в малых объ­ емах (во избежание размораживания), сохраняет титр в течение продолжительного времени. Для постановки реакции сначала приготовляют двукратно возрастаю­ щие разведения сыворотки, а затем во все пробирки до­ бавляют одинаковое количество взвеси вируса в услов­ ной дозе. Пробирки встряхивают и их содержимое стериль­ но переносят в чистые сухие пробирки. Дальнейший образ действий такой же, как и при постановке реакции по первому варианту (с использованием постоянной до­ зы сыворотки). Нейтрализующий титр сыворотки в данном случае соответствует наибольшему ее разведению, которое еще в состоянии нейтрализовать использованную в реакции дозу вируса. В связи с тем что каждым разведением сыворотки с постоянной дозой вируса заражают по меньшей ме­ ре три биологических объекта, а их реакция на эту инъекцию может быть различной, за титр сыворотки принимают то самое высокое ее разведение, которое вы­ зывает нейтрализацию вируса у 50% объектов. Эту дозу вычисляют таким же образом, как эффективную дозу 199 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека