NED359428NED

иногда инактивирует некоторые вирусные антигены. Не­ которые авторы рекомендуют употреблять 0,5 М этого раствора вместо 1 М. Еще один метод выявления IgM основан на разде­ лении антител в исследуемой сыворотке с помощью фракционирования в агаровом геле. Целесообразность этой реакции доказана при выявлении свежего зараж е­ ния вирусом краснухи. Хорошие результаты получены также при диагностике свежего заражения разделением антител сыворотки пациента с помощью ультрацентри­ фугирования в градиенте плотности сахарозы. Описанные методы, особенно последний, требуют ап­ паратуры, не применяющейся широко в диагностических лабораториях; кроме того, они довольно трудоемки. В то же время метод, основанный на совершенно дру­ гих принципах — выявление IgM в исследуемой сыво­ ротке с помощью реакции иммунофлюоресценции, очень простой и быстрый. Доказано, что эту реакцию можно применять в целях диагностики свежего заражения несколькими вирусами у людей, и широкое ее распрост­ ранение зависит только от приготовления соответствую­ щих компонентов. Зараженные культуры клеток на покровных стеклах покрывают исследуемой сывороткой, а после ее удале­ ния на препарат наносят меченную флюорохромом сыво­ ротку, содержащую антитела к IgM того вида, от кото­ рого происходит исследуемая сыворотка. Связывание этой меченой сыворотки выражается свечением в лю­ минесцентном микроскопе и указывает на присутствие в исследуемой сыворотке IgM, что в свою очередь, сви­ детельствует о свежем заражении. Если заражение пе­ ренесено в прошлом (ретроспективная инфекция), реак­ ция не происходит, однако положительный результат можно получить при использовании меченых анти-IgG антител. Такая реакция ставится обычно непрямым спо­ собом. Непрямая реакция иммунофлюоресценции (по Шмитцу и Шереру [165]) ставится следующим образом. Культуру клеток, зараженную вирусом, покрывают соответствующими разведениями сыворотки и держат при температуре 37 °С во влажной камере в течение 1,5 ч. Затем культуру промывают PBS при температуре 37 °С в течение 30 мин, добавляют кроличью сыворотку для анти-IgM человека (или того животного, у которо- 184 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека