NED359428NED

Количественная реакция вирусного гемолиза Некоторые вирусы, например ньюкаслской болезни (определенные штаммы), парагриппа-1 (Сендай), свин­ ки и ряд других в специальных условиях обнаруживают гемолитические свойства, которые тоже можно опреде­ лить количественно. Метод определения, разработанный Ху-Джун-Де, заключается в следующем (цит. по Сафо­ нову и др. [158]). 0,8 мл свежей диализированной аллантоисной жидко­ сти зараженных эмбрионов, содержащей 256 единиц гемагглютинации (см. стр. 194), смешивают с равным ко­ личеством 5%-ной взвеси эритроцитов в PBS. Контро­ лем служит та же вируссодержащая жидкость, инакти­ вированная при 70 °С в течение 20 мин тоже с эритроци­ тами. Смесь оставляют при температуре 37 °С на 4 ч, встря­ хивая каждые 30 мин, затем центрифугируют и с по­ мощью электрофотоколориметра определяют в надоса- дочной жидкости количество гемоглобина. Полностью гемолизированные эритроциты в 5% -ной концентрации получают в дистиллированной воде с добавлением не­ скольких капель NH4OH. Из этого 100%-ного гемоли­ зированного раствора готовят последовательные разве­ дения до 5%-ного гемолиза. Результат реакции в этом случае представляет собой гемолитический эффект действия исследуемого вируса в процентах. Другой способ количественного определения гемоли­ тической активности основывается на приготовлении двукратно возрастающих разведений вируса в виде не­ очищенной аллантоисной жидкости, куда добавляют равный объем 2% -ной взвеси эритроцитов (конечная концентрация 1%). После встряхивания взвесей их помещают на водя­ ную баню при температуре 37 °С на один час, затем центрифугируют и результат учитывают невооруженным глазом при помощи гемометра. Гемолитический титр вируса — это самое высшее его разведение, дающее не менее 25% гемолизов (соответствующие эталоны гемо­ лиза готовят по способу, описанному выше, только по отношению к 1%-ной взвеси эритроцитов), 178 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека