NED359428NED

Количество инфекционных центров соответствует ко* личеству клеток, способных к высвобождению вируса. Это определяется при помощи модификации метода бля­ шек. Инфицированные клетки отделяют от стекла при помощи трипсина или версена, подсчитывают, взвеши­ вают в жидкости, разводят до соответствующей кон­ центрации и вводят в монослойные культуры тем же способом, что и при инфицировании их вирусом. Даль­ нейшая процедура аналогична той, которая выполняет­ ся при титровании вируса методом бляшек. Бляшки образуются на тех участках культуры, где находилась клетка, способная к высвобождению вируса (инфекцион­ ный центр). Эффективность инфицирования определяет процент частиц популяции вируса, способных вызвать образова­ ние бляшек или других изменений после введения в тка­ невые культуры. Эффективность инфицирования может быть безусловной, тогда она выражает отношение числа БОЕ к общему количеству вирусных частиц в данной пробе, определяемому химическими или физическими методами, например в электронном микроскопе. Услов­ ная же эффективность инфицирования выражает отно­ шение числа БОЕ в данных условиях к тому их числу, которое наблюдается в стандартных условиях. Условия, необходимые для получения надлежащих значений инфекционных центров и инфекционной эффек­ тивности, обсуждаются, в частности, Дугерти [43]. Метод бляшек оказывает хорошие услуги не только при количественных исследованиях вирусов, но и при анализе их популяции, так как позволяет получить чис­ тые линии (клоны) или потомство, происходящее из одной исходной бляшкообразующей частицы. С этой целью вырезают бляшку вместе с агаром и затем путем инфицирования клеточных культур получают популяцию вируса. Рекомендуется вырезать бляшку из тех пластин, на которых их немного, — лучше всего одна, так как ви­ рус может диффундировать из одной бляшки и нахо­ диться рядом с соседней. Значение этого и других фак­ торов рассматривает Бауэр [10] на примере собственных исследований вируса ящура. Способствовать рассеива­ нию частиц вируса, находящихся на поверхности агара, может также конденсационная вода. Смешивание час­ тиц вируса из отдельных бляшек нередко вызывается добавкой нейтрального красного (для выявления бля­ 168 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека