NED359428NED

Зараженные яйца инкубируют в вертикальном поло­ жении, что облегчает распространение вируссодержа­ щей взвеси на большем пространстве и делает излиш­ ним их переворачивание. Время и температура инкуба­ ции зависят от вида вируса. Эмбрионы убивают путем охлаждения яиц, затем вынимают их вместе с желтком через отверстие, сделан­ ное на остром конце яйца. Хорион-аллантоисную обо­ лочку разрезают вдоль яйца, осторожно отделяют от скорлупы, промывают в физиологическом растворе (не­ которые исследователи советуют использовать этот раст­ вор с 10%-ным формалином для инактивации вируса и более тщательного исследования), расстилают на тем­ ной поверхности и считают очаги поражений. Среднее число очагов умножают на 10, что дает число инфекци­ онных частиц в 1 мл вируссодержащей взвеси (для ин­ фицирования использовали 0,1 мл взвеси), а затем ум­ ножают на кратность разведения, получая таким обра­ зом количество инфекционных- частиц, вызывающих об­ разование очагов, в 1 мл неразведенного вируса. Так, например, после заражения 5 эмбрионов по 0,1 мл ви­ русного материала в разведении 10~4 было обнаружено 120 очагов, что составляет в среднем 24 на один эмб­ рион. Следовательно, в 1 мл разведения было 240 ин­ фекционных частиц вируса, а в 1 мл неразведенного ма­ териала— в 104 раз больше, т. е. 2.4Х106'* Подсчет наиболее вероятного числа цитопатическмх единиц (метод НВЧЦЕ) Исследования Чанга и др. [30], как и других авто­ ров, показали, что появление цитопатического эффекта (ЦПЭ) в монослойных клеточных культурах зависит от числа вирусных частиц в исходном материале, а также от их распространения в разведениях, использованных для инфицирования культуры. Метод подсчета наиболее вероятного числа инфекционных частиц вируса, а точ­ нее цитопатогенных единиц (НВЧЦЕ), отличается от метода определения ТЦЦ50, который тоже основан на выявлении ЦПЭ. ТЦД 50 показывает, как об этом уже упоминалось выше, наиболее высокое разведение (или титр), вызывающее-цитопатогенный эффект в 50% куль­ тур. Метод позволяет вычислить число частиц вируса во взвеси, вызывающих цитопатогенное действие. Этот 166 Электр нная Научная СельскоХозяйственная Библиотека