NED359428NED

3. Разлить по 0,8 мл взвеси клеток по пробиркам (15Х Х50 мм) — одна пробирка на одну чашку. 4. Инфицировать все взвеси клеток соответствующими 10-кратно возрастающими разведениями вируса в PBS (по две пробирки на каждое разведение) и оста­ вить на 30 мин при комнатной температуре для адсорбции, встряхивая взвесь каждые 10 мин. 5. Добавить во все пробирки с клетками по 1 мл пита­ тельного агара, прогретого до 44 °С, содержимое быстро смешать путем вращения пробирки и немед­ ленно вылить на агаровый слой в чашки Петри. Не­ обходимо избегать при этом возникновения воздуш­ ных пузырей. 6. После застывания агара чашки инкубируют тем же способом, что и монослойные культуры. По истечении соответствующего времени (обычно 3—4 дня) добав­ ляют нейтральный красный, держат в течение 1 ч в термостате, а затем отсасывают его и считают бляшки описанным выше способом. Статистическая оценка разницы количества бляшек, определяемых данным методом, как и таблицы, позво­ ляющие быстро и легко выявить степень достоверности наблюдаемых отличий, были разработаны Лоренцом [107]. Определение количества инфекционных частиц вируса методом инфицирования хорион-аллантоисной оболочки Этот метод можно использовать для титрования ви­ русов, вызывающих появление на оболочке очаговых поражений, обнаруживаемых невооруженным глазом, в первую очередь поксвирусов, вирусов группы герпеса и вируса саркомы Рауса. Методика титрования очень проста. Сначала приготовляют определенное количество ку­ риных эмбрионов, как указывалось в главе 111 при опи­ сании метода заражения на хорион-аллантоисную обо­ лочку. Десятикратно возрастающими разведениями вируса в объеме 0,1 мл заражают по 8 яиц про запас, чтобы получить 5 оболочек с хорошо выраженными измене­ ниями (минимальное число для получения достоверных результатов). 165 Электронная Науч ая СельскоХозяйственная Библиотека