NED359428NED

Состав питательной среды: 10-кратно концентрированный раствор Хенк- с а ................................................................ 19,6 мл 5,6%-ный раствор N aH C O j........................... 6,0 мл гидролизат л актальбум ин а........................... 1,0 г инактивированная сыворотка крупного ро­ гатого с к о т а ............................................... 4 , 0 м л бидистиллированная вода « . . . . 70,4 мл антибиотики в обычных концентрациях. Наслоение производится способом, описан­ ным выше. Некоторые авторы предлагают добавлять нейтраль­ ный красный уже в первый агаровый слой, что позво­ ляет наблюдать развитие бляшек в динамике. Однако нейтральный красный обладает фотодинамическим дей­ ствием, и в его присутствии при доступе света в инку­ бируемых культурах не происходит нормального бляш- кообразования, поскольку свет в этих условиях повреж­ дает клетки. В этом случае приходится хранить культуры в темноте, что, конечно, очень затрудняет наблюде­ ние— осматривать культуры нужно очень быстро. По той же причине в большинстве методических разработок не рекомендуется добавлять этот краситель в первый слой агара. Время инкубации и температура должны быть опти­ мальными для бляшкообразования, вызываемого дан­ ным вирусом. После этого культуру покрывают вторым слоем 1,25%-ного агара с нейтральным красным, конечное раз- ведение которого составляет 1:13000 (1 мл 1 %-ного раствора нейтрального красного на 130 мл агара). Пе­ ред использованием агар растапливают при 100 °С, осту­ жают до 43 °С на водяной бане и разливают в чашки по 2 мл в каждую. После застывания культуры инкуби­ руют в термостате, а результат учитывают на следую­ щий день. Бляшки представляют собой округлые, неок­ рашенные, разной величины поля поврежденных клеток на фоне здоровых клеток, окрашенных в красный цвет (рис. 15 и 16). Чтобы ускорить появление бляшек, на культуру наносят 3 мл раствора нейтрального красного в разве­ дении 1:10 000 , т. е. 1 мл 1 %-ного исходного раствора на 100 мл PBS. Бляшки становятся видимыми уже че­ рез 2—3 ч инкубации в термостате. Среду удаляют и 162 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека