NED359428NED

чашках Петри, ho можно и другие, полученные* напри­ мер в матрацах различного типа и даже в пробирках Лейтона. После тщательного удаления питательной среды культуры двукратно промывают раствором Хенкса или PBS. На середину культуры наносят 0,2 мл соответствую­ щего разведения вируса, помещают ее в термостат на 1 ч для адсорбции и каждые 15 мин наклоняют для луч­ шего распространения вируса. Далее на культуру наслаивают питательный агар, состав которого зависит от типа клеток. Методические указания см. в работе Купера [35]. Д ля однослойных культур клеток эмбриона этот агар можно приготовить, например, из равных частей питательной среды и 3%-ного агара (Noble-Difco) на растворе Хенкса (АБ), автоклавированного в течение 10 мин под давлением 0,7 атм. Состав питательной среды: раствор Э р л а ............................................................ 75% 5%-ный раствор гидролизата лактальбумина . . 10% 5%-ный раствор дрожжевого экстракта «Дифко» 2% 50%-ный эмбриональный экстракт...........................8% сыворотка крупного рогатого скота . . . . 5% антибиотики в обычных концентрациях . Перед использованием агар подогревают до 100 °С, чтобы он растопился, а затем на водяной бане охлаж­ дают До 43 °С. Питательную среду, помещенную в сосуд, закрытый резиновой пробкой для предотвращения поте­ ри СОг, подогревают на водяной бане непосредственно перед смешиванием. Оба раствора смешивают, после чего прогретой пипеткой наслаивают смесь на заражен­ ные культуры, заливая чашки диаметром 5 см по 5 мл смеси, а большие — соответственно большим количест­ вом (например, матрацы Легру 10 мл). Необходимо избегать образования воздушных пузырьков. После затвердения агар и культуры ставят в термостат (те что в чашках Петри — с подачей С 0 2). Ханефельд и Ханефельд [62] для клеток почек свиньи предлагают использовать питательный агар, состоящий из равных частей питательной среды и 2% агара (Nob­ le-Difco на бидистиллированной воде). 11 3. Лярскн 161 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека