NED359428NED

ЧйТельйоМ разведении на однослойную культуру бакте­ риальных клеток, образуются отдельные бляшки. Воз­ можность использования этого метода в исследованиях Вирусов животных появилась лишь в 1952 г., после того, как Дальбекко [44] предложил использовать метод бляшкообразования в однослойных клеточных культу­ рах. Сущность последнего заключается в том, что куль­ туры заражают сильно разведенным вирусом и покры­ вают слоем агара, чтобы вирусные частицы не могли распространиться на другие места. Таким образом, по­ явление бляшек обусловлено локальным размножением вируса и его цитопатическим действием. Кроме агара, в целях предотвращения переноса ви­ руса на другие места можно использовать крахмал и метилцеллюлозу, которые действуют механически, как и агар, или добавку специфической сыворотки к пита­ тельной среде. В последнем случае антитела нейтрали­ зуют вирус, выделившийся в среду, и тем самым пред­ охраняют культуру от дальнейшего заражения. В то же время вирус распространяется только от зараженной клетки к соседней, в результате чего образуются ло­ кальные повреждения культуры или бляшки. Некоторые вирусы вызывают бляшкообразование без применения упомянутых веществ. Это некоторые пред­ ставители вирусов герпеса, поксвирусы, вирусы кори, которые быстро поражают соседние клетки, образуя первичные бляшки. Лишь после этого вирус выделяется в питательную среду культуры, что приводит к появле­ нию вторичных бляшек. Времени между возникновением первичных и вторичных бляшек вполне достаточно для того, чтобы произвести подсчет первых. Подробно метод подсчета бляшек описан Вилером и др. [ 200 ]. Определение числа вирусных частиц методом бляш­ кообразования можно осуществить двумя способами: в однослойных культурах’клеток (более употребительный способ) и во взвеси клеток в агаре. Определение числа вирусных частиц в однослойных культурах клеток Пригодны для этой цели только те культуры, кото­ рые полностью покрывают дно посуды слоем клеток. Лучше всего использовать культуры, выращенные в 160 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библ отека