NED359428NED

Описанный метод инфицирования однослойных кле­ точных культур требует, однако, двукратного открыва­ ния пробирок: первый раз для смены среды, второй раз — для введения вируса. Из практических соображе­ ний более выгодно вводить вирус вместе с поддерживаю­ щей средой. Однако в этом случае необходимо учитывать конечное разведение вируса. Для титрования вируса приготавливают ряд пробирок, обозначенных 0 , 1 , 2 и т. д., и вносят в них по 9 мл поддерживающей среды. В первую добавляют 1 мл взвеси вируса и делают оче­ редное разведение, перенося в каждую последующую пробирку 1 мл жидкости из предыдущей. Теперь необхо­ димо объяснить употребление нулевой ( 0 ) пробирки. Введение 0,15 мл взвеси вируса в пробирку, содержа­ щую 1,5 мл поддерживающей среды, давало в первом описанном нами случае 10-кратное разведение. Чтобы обеспечить то же самое и при этом способе непосредст­ венного разведения вируса в поддерживающей среде, конечное разведение получают, делая предварительное 10-кратное разведение в нулевой пробирке. Таким об­ разом пробирка № 1 соответствует разведению вируса 10 -1, № 2 — 10~2 и т. д. Заражают клеточные культуры внесением в пробир­ ки после удаления из них ростовой среды по 1,5 мл взвеси вируса в поддерживающей среде. Приготовлен­ ного количества по 9 мл каждого разведения достаточ­ но для инфицирования шести пробирочных тканевых культур. Иногда, особенно в случае титрования лабильных вирусов, клеточные культуры заражают непосредствен­ но после приготовления очередного разведения вируса. Так, в первом примере после разведения материала в пипетку надо набрать количество вируса, необходимое для проведения следующего разведения, например 0,2 мл + количество вируса, необходимое для зараже­ ния четырех клеточных культур (0 ,1 5 X 4 = 0 ,6 мл), т. е. вместе 0,8 мл. Из этого количества 0,2 мл вносят в сле­ дующую пробирку (для приготовления очередного раз­ ведения), а 0,6 мл разливают по 0,15 мл в 4 клеточные культуры. Свежей пипеткой перемешивают содержи­ мое следующей пробирки с очередным разведением ви­ руса, берут из нее 0,8 мл, переносят в следующую 0,2 мл и для заражения четырех культур клеток по 0,15 мл и т. д. 10' 147 Элект о ная Научная СельскоХозяйст енная Библиотека