NED359428NED

П о с т а н о в к а о п ы т а (по Майру и др.) 1. Взвесь исследуемого вируссодержащего материала смешать с 10% объема хлороформа, встряхивать в течение 1 ч при 4 °С, после чего материал оставить при той же температуре до следующего дня или по меньшей мере на 2 ч. 2. Взвесь центрифугировать в течение 30—45 мин при 2200 g. При этом образуются 3 слоя: нижний содер­ жит хлороформ с растворимыми в нем субстанциями, средний — осажденный белок, верхний — вирусный материал и около 0,8% растворимого в воде хлоро­ форма, который токсичен для тканевых культур. По­ этому рекомендуется вводить пробы не прямо на плотно выросший клеточный слой, как это делается при адсорбции вируса, а в поддерживающую среду. 3. Титровать оба материала — обработанный и не об­ работанный хлороформом для выявления в них виру­ са. У вирусов, резистентных к действию хлороформа, наблюдается лишь незначительное снижение титра— разница составляет не более 0,996 lg при 10-кратных разведениях вируса и использовании четырех проби­ рок на каждое разведение. В таких случаях наблю­ дается иногда даже некоторое увеличение титра ви­ руса. Обработка хлороформом чувствительных к его действию вирусов приводит к полной (100%-ной) инактивации их инфекционности. Лишь в редких случаях, когда исследуемый материал был очень бо­ гат белком (например, кровь), в нем сохранялась слабо выраженная инфекционное™. Герпес-, покс-, миксо-, парамиксо-, рабдо-, корона-, тога-, онкорна- и аденовирусы имеют липидную обо­ лочку и в связи с этим все они чувствительны к дей­ ствию хлороформа. Отметим, однако, что если опыт проводится при температуре 37 °С, а не 4°С, как указы­ валось выше, инактивация инфекционное™ под дейст­ вием хлороформа может наблюдаться и у вирусов, не имеющих липидной оболочки. Определение чувствительности к pH 3,0 Это свойство также имеет ценность для идентифика­ ции вируса. Майр и др. [118] рекомендуют использо­ вать в этих опытах буферный раствор Мак-Ильвена, в состав которого входят два основных раствора: 134 Электро ная Научная СельскоХозя ственная Библиотека