NED359428NED

Определение типа нуклеиновой кислоты Это определение можно проводить разными метода­ ми. Наиболее простой основан на торможении синтеза Д Н К -coдержащих вирусов галогеновыми производными уридина: 5-йод-дезоксиуридином (IDU), 5-бром-дезок- сиуридином (BDU) и 5-фтор-дезоксиуридином (FDU). IDU — наиболее активен, но в отличие от остальных плохо растворим. П о с т а н о в к а т е с т а (пит. по Майру и др. [118]). 1. IDU, BDU или FDU растворяют в 1 мл поддержива­ ющей среды. В таком состоянии растворы можно хранить длительное время при температуре 4°С. Перед началом работы их разводят в 10 раз, доводя конечную концентрацию ингибиторов до 100 мкг/мл! 2. Клеточные культуры в пробирках Лейтона промы­ вают теплым раствором PBS, инфицируют вирусом (0,3 мл) и оставляют на 1 ч при комнатной темпе­ ратуре (22°—25 °С) для адсорбции. 3. Надклеточную жидкость удаляют, клетки промыва­ ют, к части пробирок добавляют поддерживающую среду, содержащую ингибиторы синтеза ДНК, а контрольные пробирки заливают средой без ингиби­ торов. Дальнейшие контроли состоят из неинфициро- ванных клеточных культур, покрытых средой с инги­ битором и без него. Кроме того, аналогичный экс­ перимент проводят в целях контроля с известным цитопатогенным вирусом, содержащим ДНК и из­ вестным цитопатогенным вирусом, содержащим РНК. 4. Все культуры инкубируют при температуре 37°С; ежедневно отбирают по две пробирки из каждой опытной группы и замораживают при температуре от —20 до —70 °С. После полной деструкции клеток или спустя б—8 дней опыт прекращают и все пробы титруют на содер­ жание в них вируса. Результаты титрования должны четко указывать на выраженное торможение репродукции ДНК-содержа- щего вируса, в то время как синтез РНК-содержащего вируса не должен меняться. Подавление синтеза неизвестного вируса указывает, что он содержит ДНК, отсутствие ингибиции синтеза 132 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека