NED359428NED

реакцию серонейтрализации (лучше на том же, из которого вирус выделен). 2. Развести специфическую стандартную сыворотку в растворе Хенкса, чтобы она содержала 20 нейтрали- зирующих единиц в объеме, предназначенном для введения (т. е. 0,2 мл для культуры клеток в про­ бирке; 0,1 мл—для мышей-сосунков при внутримозго­ вом заражении; 0,1 мл — для оплодотворенных яиц и т. д.). Концентрация 20 нейтрализующих единиц сыворотки в объеме инокулята определена условно для идентификации неизвестных выделенных виру­ сов. Содержится она в определенном объеме сыво­ ротки, в 20 раз менее разведенной, чем ее нейтрали­ зующий титр для известного вируса. Если он равен 1 :512 в объеме 0,2 мл, то 20 единиц будет содер­ жаться в 0,2 мл разведения 1: 26. 3. Развести неизвестный (исследуемый) вирус в рас­ творе Хенкса, чтобы в предполагаемом количестве инокулята содержалось 200 IDso (что является инди­ каторной дозой вируса). Поскольку инокулят будет представлять собой смесь равных объемов вируса и сыворотки, доза вируса будет равна 100 Ш 50 . 4. Добавить 1 мл индикаторной дозы вируса к такому же объему стандартной сыворотки. Лучше всего использовать пробирки с завинчивающимися колпач­ ками, что позволит тщательно перемешать оба ком­ понента (при использовании обычных пробирок по­ ступать, как указано на стр. 122). 5.. Приготовить контрольную взвесь вируса, смешивая 1 мл индикаторной дозы с равным объемом раство­ ра Хенкса. 6. Инкубировать смесь вируса с сывороткой и конт­ рольный вирус в соответствующих условиях (время и температура), перемешивая каждые 30 мин. 7. Заразить смесями соответствующие биологические объекты. 8. Одновременно титровать индикаторную дозу, зара­ жая биологические объекты 10-кратно возрастаю­ щими разведениями — от неразведенного до 10~4. Несмотря на то, что количество вируса было определе­ но перед началом реакции, это является дополнитель­ ным контролем количества вируса, фактически исполь­ зованного в реакции серонейтрализации. Такое допол­ нительное исследование после инокуляции смеси виру- 124 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека