NED359428NED

ванйя у экспериментальных животных, гибель или из­ менения куриных эмбрионов, ЦПЭ или фокусы разруше­ ний в культурах клеток, будучи смешанными со спе­ цифической для них сывороткой, не вызывают ни забо­ леваний, ни гибели куриных эмбрионов, ни поврежде­ ния культур клеток. Реакция в целях идентификации вируса может быть проведена с постоянной дозой вируса при уменьшаю­ щихся количествах сыворотки или с постоянной дозой сыворотки при уменьшающихся концентрациях вируса. Последний метод позволяет более точно идентифици­ ровать выделенный вирус без необходимости предвари­ тельного определения его инфекционного титра. П о с т а н о в к а р е а к ц и и с п о с т о я н н о й д о з о й с ы в о р о т к и 1. Приготовляют три ряда 10-кратно возрастающих разведений исследуемого вируса в объемах 0,5 мл (или других, в зависимости от предполагаемого ис­ пользования для заражения). Можно также подгото­ вить один ряд разведений в соответственно большем количестве, а затем разделить его на три ряда. 2. Добавляют в пробирки по 0,5 мл: в первый ряд — известную положительную стандартную сыворотку для предполагаемого вируса; во второй — нормаль­ ную сыворотку (не содержащую антител), а в тре­ тий — PBS. Штативы встряхивают, после чего содер­ жимое пробирок стерильно переливают в сухие про­ бирки в соответствии с рядностью. Это делается для того, чтобы обеспечить полное взаимодействие виру­ са с сывороткой, в противном случае вирус, находя­ щийся на стенках пробирки, не будет подвергаться нейтрализации сывороткой, а использование его для последующего заражения может дать ошибочный ре­ зультат. От переливания можно отказаться в тех случаях, когда вирус вносится непосредственно на дно пробирки без загрязнения им стенок или когда смесь приготовляют в пробирках с закручивающими­ ся колпачками, что позволяет основательно встрях­ нуть ее. Разведения, содержащие смесь исследуемого виру­ са, оставляют на различное время при комнатной тем­ пературе, температуре 37 °С или 4°С (в зависимости от определенных оптимальных условий, необходимых для взаимодействия вируса и антител). Низкие температуры 122 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека