NED359428NED

6. Штатив (доску) оставить на 1 ч при комнатной температуре для связывания вируса с антителами. 7. Долить до 0,5 мл 0,75%-ной взвеси эритроцитов в PBS (Хоскинс добавляет 0,25 мл 0,5%-ной взвеси) во все пробирки или углубления в пластинах, переме шать ингредиенты, осторожно встряхивая. Оставить пробирки при комнатной температуре (или другой, в зависимости от оптимальных условий, необходимых для склеивания эритроцитов данным вирусом) на определенное время, обычно на 20—30 мин, что за висит в основном от концентрации эритроцитов. 8. Учесть результаты и определить титр стандартной сыворотки, тормозящей гемагглютинацию. Если в пробе титр стандартной сыворотки с неизвестным вирусом отличается не более чем в 2 раза от титра, получаемого с известным стандартным вирусом, то результат идентификации считается положительным. Реакция задержки гемадсорбции В основе реакции лежит способность специфиче ских антител взаимодействовать с поверхностью зара женных клеток таким образом, что они теряют свойство адсорбировать эритроциты. Реакция может быть, ко нечно, использована только для идентификации виру сов, вызывающих явление гемадсорбции. П о с т а н о в к а р е а к ц и и (по Соколову [175]) После инкубации культуры клеток в течение време ни, обеспечивающего появление гемадсорбции, из про бирок удаляют питательную среду и культуру промы вают раствором Хенкса. Затем в часть пробирок добавляют по 0,2 мл не- разведенной или разведенной 1 :10 специфической сы воротки и 0,6—0,8 мл раствора Хенкса, а в остальные пробирки (контрольные) — только раствор Хенкса и оставляют все культуры в наклонном положении слоем клеток вниз на 15—30 мин при комнатной температуре. После этого во все пробирки добавляют по 0,2 мл 0,40%-ной взвеси эритроцитов, оставляют их в наклон ном положении на следующие 5 мин, после чего учиты вают результат. Если в пробирках с сывороткой гемадсорбции не наступила, а в контрольных была очевидной, то реак ция идентификации считается положительной, 120 Электронна Научная СельскоХозяйственная Библиотека