NED359428NED

сена, но они легко разделяются трипсином. Эпителиаль­ ные клетки одинаково хорошо разделяются под действи­ ем обоих этих веществ. При приготовлении взвеси клеток для более точных количественных исследований иногда возникает необхо­ димость в определении процента живых и погибших клеток. Для этой цели можно использовать различные красители с избирательным действием, из которых ча­ ще всего используются два, описанных ниже. П о д с ч е т к о л и ч е с т в а ж и в ы х к л е т о к 1. Добавить 0,05 мл 0,01%-ного раствора нейтрального красного к 1 мл клеточной взвеси; 2. Инкубировать взвесь при 37 °С в течение 20 мин. 3. Подсчитать окрашенные клетки (окрашиваются толь­ ко живые клетки). П о д с ч е т к о л и ч е с т в а м е р т в ы х к л е т о к Добавить 0,05 мл 1%-ного раствора трипанового синего к 1 мл клеточной взвеси, произвести подсчет клеток непосредственно после добавления красителя, поскольку трипановый синий токсичен для них (окра­ шиваются только мертвые клетки). Методика выращивания культуры клеток в суспензии Методика основана на том, что клетки, помещенные в питательную среду, инкубируют в термостате в спе­ циальном сосуде на магнитной мешалке, дающей 2400 оборотов в час. При непрерывном перемешивании взвеси в нее добавляют 0,1% метилцеллюлозы, что предотвращает оседание клеток на дно сосуда. В этих условиях клетки растут и размножаются. Их можно использовать для различных исследований, а добавле­ ние в сосуд свежей питательной среды способствует дальнейшему размножению оставшихся в ней клеток. Время генерации составляет 15—50 ч. По достижении определенной максимальной концентрации клеток во взвеси дальнейшее их размножение прекращается. Этим способом можно культивировать все переви­ ваемые клеточные линии, но (по неясным еще причи­ нам) не клетки первичных культур и диплоидные кле­ точные линии*. Взвешенной культурой клеток нельзя * Диплоидные клетки ВНК-21 клон 13 успешно размножаются в суспензионной культуре. — Прим. ред. 105 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека