NED359428NED

7. В м а тр ац Р у ем костью 1 л внести 6 млн. клеток в 100 мл питательной среды следую щ его состава: раствор Хенкса.............................................................70% телячья сыворотка...................................................... 20% 5%-ный раствор гидролизата лактальбумина . . 10% антибиотики в количествах, указанных выше Клетки перевиваемых линий размножаются очень быстро, и при их пассировании взвесь, полученную из одной емкости, можно разделить на 2—20 емкостей. В зависимости от концентрации клеток в исходной взвеси при посеве образование монослоя на стенках со­ суда происходит в течение 1—5 дней. Время генерации составляет от 10 до 70 ч. 8. Матрац, плотно закрытый резиновой пробкой, поме­ стить в горизонтальном положении в термостат при 37 °С. Если культура приготовляется в чашках Петри диаметром 5—6 см, то в них заливают 2 млн. клеток в 5 мл питательной среды. Чашки помещают в термо­ стат с постоянной подачей С 0 2. Через несколько дней получают монослой клеток, который можно снять, разделить и перенести в матра­ цы или пробирки для дальнейшего размножения или за­ ражения. Д ля высвобождения клеток используется обычно версен, который обеспечивает получение однородной взвеси. Д ля этого из сосуда удаляют питательную среду, клетки промывают буферным раствором, не содержа­ щим кальция и магния, подогретым до 37 °С, и залива­ ют раствором версена следующего состава: натриевая соль версена . N a C l................................ КС1 . . . . . . Na,HP04 . . . . . KH2P04 ......................... глюкоза . . . . . бидистиллйрованная вода 0,2 г 8,0 г 0,2 г 1,15 г 0,2 г 0,2 г до 1000,0 г Культуру инкубируют в течение 10— 15 мин и встря­ хиванием сосуда высвобождают клетки. Затем взвесь центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 1000 об/мин, удаляют надосадочную жидкость и добав­ ляют ростовую питательную среду, в которой клетки взвешивают пипетированием. Не все клетки одинаково реагируют на действие трипсина и версена. Клетки ти­ па фибробластов не удается разделить при помощи вер- 104 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека