NED359428NED

рожденных хомячков), MDBK (почки крупного рогато: го скота), SK (почки свиньи), МА 188 (семенники ло­ шади), DK (почки собаки), KL (легкие кошки). Относительно широко используется штамм HeLa, по­ этому и на его примере мы рассмотрим манипуляции; применяемые для размножения лабораторных клеточ­ ных линий (отличия от других клеточных линий каса­ ются главным образом вида питательной среды, обеспе­ чивающей оптимальный рост). Размножение клеток НеLa Обычно осуществляется в крупных сосудах, напри­ мер матрацах Ру. 1. Из бутылки с хорошо выросшим монослоем слить пи­ тательную среду. 2. Налить 15 мл 0,25%-ного раствора трипсина, подо­ гретого до комнатной температуры. Матрацы поло­ жить так, чтобы клетки были покрыты жидкостью (слой клеток внизу) в течение 2—3 мин. 3. Слить трипсин и матрацы поставить на 15 мин в об­ ратном положении (слой клеток вверху). Удалением трипсина достигается уменьшение количества жид­ кости, подвергающейся впоследствии центрифугиро­ ванию, а оставшегося трипсина достаточно для энзи­ матической обработки слоя клеток. Некоторые кле­ точные линии наряду с ферментативной обработкой требуют и механических приемов. Клетки соскабли­ вают резиновым шпателем, и часть их при этом раз­ рушается. 4. Смыть слой клеток при помощи струи питательной среды, пропущенной через пипетку. При снятии кле­ ток с нескольких матрацев можно использовать взвесь, полученную из предыдущего матраца при этом увеличивается концентрация клеток в исходном объеме. 5. Смыв клеток диспергировать при помощи иглы и шприца или пипетированием. Равномерность диспер­ гирования клеток можно проконтролировать с по­ мощью микроскопа. 6. Развести в 10 раз небольшое количество взвеси и определить количество клеток в I мл в камере Горя­ ева. 103 Электронная Научная Сельс оХозяйственная Библиотека