NED359428NED

3. Ткань зародыша поместить в колбу с металлическим стержнем, залить подогретым до 37 °С раствором трипсина ,из расчета 10 мл на один зародыш и поме­ стить в водяную баню на электромагнитную мешал­ ку. 4. Трипсинизировать в течение 20 мин, после чего кле­ точную взвесь профильтровать через несколько сло­ ев марли и центрифугировать в течение 5 минут при скорости вращения 1000 об/мин. 5. Дважды промыть клетки, добавляя PBS и центри­ фугируя. 6. Клеточный осадок развести в соотношении от 1 :200 до 1:400 (см. стр. 98) в питательной среде следую­ щего состава: раствор Э р л а ........................................ ...... 85% телячья с ы в о р о т к а ..................................................... 10% 5%-ный раствор гидролизата лактальбумина 5% антибиотики в количествах, указанных выше 7. Взвесь клеток разлить по пробиркам по 1,5 мл (даль­ нейшая последовательность манипуляций та же, что и при приготовлении культуры клеток почек свиньи). Монолитный слой клеток образуется в течение 24 ч. Однослойная культура клеток почки эмбриона П р и г о т о в л е н и е к у л ь т у р ы [24]: 1. Стерильно извлечь 19—20-дневные эмбрионы на ло­ ток и после декапитации удалить содержимое брюш­ ной полости. Почечную ткань перенести в раствор Хенкса при комнатной температуре (около 30 мл на 4—5 зародышей). 2. Тщательно промыть почки и перенести их в 10 мл 0,5%-ного раствора трипсина. 3. Пробирки интенсивно встряхивать в течение 2 мин для размельчения ткани на меньшие глыбки, а затем поместить в термостат при 37,5 °С. 4. Каждые 5 мин в течение 20 мин пробирки энергично встряхивать. Через 20 мин обработка клеток закан­ чивается, однако отмечено, что действие трипсина даже в течение 45 мин не оказывает заметного пов­ реждающего действия на клетки. 5. Центрифугировать взвесь в течение 10 мин при ско­ рости вращения 200 об/мин. 6. Промыть дважды раствором Хенкса. 101 Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека