NED354493NED

11.5.7. Определение содержания белкового азота по методу Барнштейна Содержание белка в семенах у каждого вида растений является вели­ чиной относительно стабильной и определяется главным образом генетиче­ скими особенностями культуры. В процессе налива семян происходит интенсивный синтез белков за счет небелковых форм азота, изменяется также и компонентный (фракционный) состав белков. Изучение содержания белко­ вого азота и количества белков как в процессе онтогенеза, так и в конечном урожае имеет теоретический интерес с целью изучения обмена азотсодержа­ щих веществ, а также и практический - повышение пищевой ценности и тех­ нологического качества продукции в зависимости от действия регулируемых факторов внешней среды: применение удобрений, агротехнических приемов выращивания и др. Принцип метода. Метод основан на способности белковых молекул денатурировать и выпадать в осадок под воздействием ионов тяжелых метал­ лов, кислой и щелочной реакции среды и других факторов. Определение белкового азота включает выделение белка из общей растительной массы. Для этого белок переводят в осадок с использованием сернокислой меди в щелочной среде (C uS0 4 • Cu(OH)2), а небелковые азоти­ стые соединения, хорошо растворимые в водных растворах, отмывают водой или слабым раствором осадителя. Отмытый и подсушенный осадок белковых веществ озоляют в концентрированной H 2 S 0 4, как и при определении валово­ го азота. Ход анализа. Навеску тонкоизмельченного растительного материала массой 0,2-0,5±0,0002 г, взятую на аналитических весах, помещают в химиче­ ский стакан емкостью 150-200 см3, приливают 50 см 3 дистиллированной во­ ды, перемешивают содержимое стеклянной палочкой с резиновым наконечником, которая остается в стакане до конца анализа, и устанавливают стакан на кипящую водяную баню. После того как температура в стакане с растительным материалом достигает 60 °С, не охлаждая содержимого стака­ на, прибавляют в него 25 см 3 раствора C uS 0 4 • 5Н20 (60 г соли растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 дм3), а затем при помешивании небольшими порциями туда же приливают 25 см 3 раствора NaOH (12,5 г ре­ актива растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 дм3). Об­ разующаяся основная соль C uS 0 4 • Cu(OH )2 осаждает белки в виде комплекса белковых молекул и меди. Стакан с содержимым ставят на отстаивание в те­ чение 1-1,5 часов и в это время готовятся к фильтрованию. Для этого в коническую колбу емкостью 250-300 см 3 или такой же вместимости химический стакан вставляют воронку с плотным складчатым бумажным фильтром. Фильтр по размерам должен быть таким, чтобы поме­ щался в воронке на 0,5-1,0 см ниже краев воронки. После этого надосадоч- ную жидкость сливают на фильтр по стеклянной палочке. Осадок в стакане промывают декантацией несколько раз горячей ди­ стиллированной водой, постепенно перенеся осадок на фильтр. Затем осадок полностью без потерь переносят на фильтр и продолжают промывание горя­ чей водой до исчезновения сульфат-ионов в фильтрате. Полноту промывания определяют по качественной реакции с ВаС12. Для этого несколько капель из воронки помещают на часовое стекло и добавляют из капельницы 2-3 капли 83