NED354493NED

фосфоргидролитических ферментов характеризует активность биохимиче­ ских процессов мобилизации органического фосфора в почве. При определении фосфатазной активности в качестве субстрата ис­ пользуют моноэфиры фосфорной кислоты (фенолфталеинфосфат натрия). Ход анализа. Навеску просеянной воздушно-сухой почвы массой I, 0 г помещают в колбу объемом 50 см3, пипеткой приливают 0,9 см 3 дистил­ лированной воды, 1 см 3 1 %-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия, прибавляют 3 капли толуола, закрывают корковой пробкой и взбалтывают в течение 5 минут. После этого колбу ставят в термостат при температуре 30 °С на 1 час. Контролем служит стерилизованная при температуре 180 °С в тече­ ние 3 часов почва. После инкубации в термостате в колбу приливают 45 см 3 дистиллиро­ ванной воды и взбалтывают 5 минут. Затем содержимое колбы фильтруют через беззольный фильтр в мерную колбу емкостью 50 см 3 и дистиллирован­ ной водой доводят объем до метки. 20 см 3 полученного фильтрата пипеткой переносят в пробирку, добавляют 2 см 3 10 %-ного раствора N H 4O H , переме­ шивают. Окрашенный раствор колориметрируют на фотоэлектроколоримет­ ре в кювете с толщиной просвечиваемого слоя 5 мм при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). П р и м еч а н и е. Если раствор приобретает бурую окраску, в колбу до­ бавляют 1 см 3 насыщенного раствора алюмокалиевых квасцов. Количество фенолфталеина находят по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. В мерные колбы объемом 50 см 3 приливают 0, 1, 2, 4, 6 , 8 , 10 см 3 рабочего образцового раствора фе­ нолфталеина ( 0,01 г фенолфталеина растворяют в 60 см 3 этилового спирта и объем доводят до 100 см3), в 1 см 3 которого содержится 0,1 мг фенолфталеи­ на, и добавляют все реактивы, как описано в ходе анализа почвы. Н а оси абсциссы откладывают содержание фенолфталеина в соответ­ ствующем объеме образцового раствора, на оси ординаты - величины опти- чесокй плотности. Для пересчета активности фосфатазы в миллиграммы Р 2 О 5 использу­ ют коэффициент 0,45 (в субстрате одна молекула фенолфталеина связана с двумя молекулами фосфорной кислоты). Вычисление результатов анализа. Активность фосфатазы рассчи­ тывают по формуле: (а-б)-р -0,45 -100 X = , 771 где X - активность фосфатазы, мг Р 2 0 5 на 100 г почвы за 1 час; а - количество фенолфталеина в испытуемом образце почвы, найденное по калибровочному графику, мг; б - количество фенолфталеина в контроле, найденное по калибровочно­ му графику, мг; р - разведение; m - навеска почвы, г; 0,45 - коэффициент перевода фенолфталеинфосфата натрия в Р 2 О 5 ; 100 - коэффициент для пересчета на 100 г почвы. II. 7. ДИАГНОСТИКА МИНЕРАЛЬНОГО ПИТАНИЯ РАСТЕНИЙ 115