NED354493NED

кислой среде осаждает белки. Раствор снова отфильтровывают в пробирку. К фильтрату прибавляют 1 см 3 2 %-ного рабочего раствора нингидрина ( 2,0 г нингидрина растворяют в ацетоне и доводят объем до 100 см3. Рабочий рас­ твор готовят, смешивая 95 см 3 раствора с 1 см 3 СН3СООН и 4 см 3 дистилли­ рованной воды непосредственно перед употреблением) и взбалтывают. Пробирку с полученным раствором нагревают в кипящей водной бане в течение 10 минут. Затем окрашенный раствор из пробирки переносят в мерную колбу емкостью 50 см3, доводят дистиллированной водой объем до метки, перемешивают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре в кю­ вете с толщиной просвечиваемого слоя 5 мм при длине волны 540 нм (зеле­ ный светофильтр). Количество глицина находят по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. 0,1 г чистого глицина рас­ творяют в 100 см 3 дистиллированной воды. В 1 см 3 раствора содержится 1,0 мг глицина. В мерные колбы объемом 50 см 3 приливают 0, 2, 4, 6 , 8 , 10 см 3 рас­ твора глицина и добавляют все реактивы, как описано в ходе анализа почвы. На оси абсциссы откладывают содержание глицина в соответствую­ щем объеме раствора глицина, на оси ординаты - величины оптической плотности. Вычисление результатов анализа. Активность протеазы рассчи­ тывают по формуле: а -р -10 х = — — , т где X - активность протеазы, мг глицина на 10 г почвы за 24 часа; а - количество глицина, найденное по калибровочному графику, мг; р - разведение; m - навеска почвы, г; 10 - коэффициент для пересчета на 10 г почвы. 11.6.12. Определение активности фосфатазы (Щелочная фосфатаза. КФ 3.1.3.1. Кислая фосфатаза. КФ 3.1.3.2) Принцип метода. Фосфатаза относится к группе ферментов, катали­ зирующих гидролиз фосфорорганических соединений. В почве имеются кис­ лые и щелочные фосфатазы, гидролизующие моноэфиры с выделением минерального фосфора и органического радикала субстрата. Методы определения активности почвенных фосфатаз основаны на определении отщепленного при ферментативной реакции неорганического фосфата или органической части молекулы субстрата - фосфорорганического соединения. Щ елочная фосфатаза определяется при pH 8,0; кислая фосфатаза - при pH 5,4; общая фосфатазная активность почвы - при pH естественной почвы. Фосфорорганические соединения составляют от 20 до 80 % фосфора почвы и превращаются в доступные для растений формы при ферментатив­ ном гидролизе с отщеплением остатков фосфорной кислоты. Активность 114