NED354493NED

вого раствора NH 4 CI (запасной образцовый раствор: 0,382 г перекристаллизо- ванного NH 4 CI помещают в мерную колбу на 1 дм3, растворяют в дистилли­ рованной безаммиачной воде и доводят объем этой же водой до метки; рабочий образцовый раствор готовят разбавлением запасного образцового раствора в 10 раз), в 1 см 3 которого содержится 0,01 мг аммиака. В дальней­ шем проводят те же операции, как и при анализе опытной почвы. На оси абсциссы откладывают содержание аммиака в соответствую­ щем объеме рабочего образцового раствора, на оси ординаты - величины оп­ тической плотности. Вычисление результатов анализа. Активность аспарагиназы рас­ считывают по формуле: а -р -100 где X - активность аспарагиназы, мг NH 3 на 100 г почвы за 24 часа; а - количество NH3, найденное по калибровочному графику, мг; р - разведение; m - навеска почвы, г; 100 - коэффициент для пересчета на 100 г почвы. П р и м еч а н и е. Разведение окрашенных растворов не допускается. Анализ повторяют с меньшим объемом вытяжки. Окраска раствора сохраня­ ется не более 60 минут. 11.6.11. Определение активности протеазы (Пептидил - пептидгидролазы. КФ 3.4.4.) Принцип метода. Протеолитические ферменты катализируют гид­ ролитическое расщепление белковых веществ до пептидов и гидролиз этих продуктов до аминокислот. При определении активности протеаз в почве в качестве субстрата применяют обычно казеин или желатин. Метод основан на учете количества аминокислот, образующихся при протеолизе внесенных в почву белков путем связывания их в окрашенные комплексы. Ход анализа. Навеску просеянной воздушно-сухой почвы массой 2,0 г помещают в колбу емкостью 50 см3, пипеткой приливают 10 см 3 1 %- ного раствора желатина или казеина, приготовленного на фосфатном буфере (pH 7,4) (11,876 г Na 2 H P 0 4 растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе на 1 дм 3 и доводят объем до метки; 9,078 г КН 2 Р 0 4 растворяют в ди­ стиллированной воде в мерной колбе на 1 дм 3 и доводят объем до метки. Смешивают 80 см 3 раствора Na 2 H P 0 4 и 20 см 3 раствора КН 2 Р 0 4) и 0,5 см 3 то­ луола. Колбу закрывают корковой пробкой, взбалтывают 3 минуты и ставят в термостат при температуре 30 °С на 24 часа. Контролем служит стерилизо­ ванная при температуре 180 °С в течение 3 часов почва. После инкубации в термостате содержимое колбы отфильтровывают. В стеклянную пробирку берут 5 см 3 фильтрата, пипеткой прибавляют 0,5 см 3 0,1 и. раствора H 2 S 0 4, приливают 3 см 3 20 %-ного Na 2 S 0 4, который в слабо­ 113