NED354493NED

где X - активность нитритредуктазы, мг восстановленного N 0 2~ на 1 г поч вы за сутки; а - содержание нитритного азота, найденное по калибровочному графику, мг; р - разведение; m —н авеска почвы, г. 1 1 .6 .5 . О п р е д е л е н и е а к т и в н о с т и су л ь ф а т р е д у к т а зы (НАД • Н2 : сульфат-оксидоредуктаза. КФ 1.8.3) Принцип метода. Сульфатредуктаза катализирует реакцию восстанов­ ления сульфатов до сульфитов, которые восстанавливаются сульфитредуктазой до сульфидов по схеме: Na 2 S 0 4+ НАД • Н 2 сульфатРедУктаза^ Na2s o 3+ Н20 + НАД, Na 2 S 0 3 + НАД • Н 2 сульфитРедуктаза^ Na2§ + Н г 0 + НАД. Метод основан на учете уменьшения количества сульфатов в почве после анаэробной инкубации с субстратом - сернокислым натрием Na 2 S 0 4. Ход анализа. Навеску просеянной воздушно-сухой почвы массой 1,0 г по­ мещают в вакуумную колбу с притертой стеклянной пробкой, прибавляют 20 мг СаС 0 3 и перемешивают. Затем в колбу пипеткой приливают 1 см 3 0,5 и. раствора Na 2 S 0 4 и 1 см 3 5 %-ного раствора глюкозы в качестве донора водорода. Воздух из колбы эвакуируют при разрежении 10-12 мм рт. ст. в течение 2-3 минут. Колбу встряхивают и ставят в термостат при температуре 37 °С на 7 суток. В качестве контроля используют стерилизованную при температуре 180 °С в течение 3 часов почву с реактивами. После инкубации в колбу приливают 100 см 3 дистиллированной воды, перемешивают и отфильтровывают через беззольный фильтр. Берут пипеткой 25 см 3 фильтрата, помещают в коническую колбу объемом 200 см3, доливают цилиндром дистиллированной воды до 100 см3, опускают в колбу кусочек бумажки индикатора Конго красного и подкисляют раствор разбавленной НС1 (1:1) до сине-фиолетовой окраски индикаторной бумаги (pH 3,0). Колбу нагревают до кипения, в горячий раствор из бюретки прилива­ ют 10 см 3 осадительной смеси ВаС1 2 + MgCl 2 (смешивают в равных объемах 0,01 М ВаС1 2 и 0,01 М MgCl2), хорошо перемешивают и оставляют на 2-3 ча­ са или на сутки. После этого в раствор пипеткой прибавляют 2-3 капли 1 %-ного раствора Na 2 S, приливают пипеткой 2 см 3 5 %-го раствора соляно­ кислого гидроксиламина и нейтрализуют по каплям 10 %-ным раствором ТЧБЦОН д о изменения цвета бумажки Конго красного от сине-фиолетового в красный (pH 5,2). Затем цилиндром приливают 10 см 3 буферной смеси NH 4 C1 + NH4OH (pH 10,0) (25,0 г х.ч. NH 4 C1 растворяют в 100 см 3 дистиллированной воды, приливают 200 см 3 20 %-ного раствора NH4OH и дистиллированной водой доводят объем до 1 дм3), прибавляют 20 мг индикатора хромоген чер­ ный или хром темно-синий и титруют 0,01 М раствором трилона Б до изме­ нения окраски индикатора. П р и м е ч а н и е . 104