NED354493NED

часов почва. После инкубации в термостате в колбу приливают 25 см 3 этило­ вого спирта-ректификата и встряхивают в течение 5 минут. Полученный рас­ твор ТФФ отфильтровывают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм. Количество трифенилформазана рассчитывают по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. В мерные колбы емкостью 25 см 3 приливают 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8 , 9, 10 см 3 стандартного раствора ТФФ, содержащего в 1 см 3 0,1 мг ТФФ, доводят объем этанолом до метки и коло­ риметрируют. На оси абсциссы откладывают взятые объемы стандартного раствора ТФФ, а на оси ординаты - величины оптической плотности раствора. Активность дегидрогеназы выражается в миллиграммах ТФФ на 10 г почвы за сутки, ошибка определения ± 8,0 %. Вычисление результатов анализа. Активность дегидрогеназы рас­ считывают по формуле: а- V - 10 X = ------------, ш где X - активность дегидрогеназы, мг ТТФ на 10 г почвы за сутки; а - количество ТТФ, найденное по калибровочному графику, мг; V - объем вытяжки, см3; m - навеска почвы, г; 0 - коэффициент для пересчета на 10 г почвы. 11.6.3. Определение активности нитратредуктазы (Восстановленный НАД: нитрат-оксидоредуктаза. КФ 1.6.6.1) Принцип метода. Процессы восстановления нитратного азота в поч­ ве до аммиака катализируют ферменты нитратредуктазы и нитритредуктазы. Нитратредуктаза действует на восстановленный НАД в качестве донора во­ дорода и переносит водород к кислороду нитратов. В результате действия нитратредуктазы нитраты превращаются в нитриты: НАД Н 2 + N 0 3 = НАД + N 0 2 + Н 2 0 . Метод определения активности нитратредуктазы в почве основан на учете уменьшения количества нитратного азота при анаэробной инкубации в почве. Ход анализа. Навеску просеянной воздушно-сухой почвы массой 1,0 г помещают в пробирку, добавляют 20 мг С аС 0 3, встряхивают, прилива­ ют пипеткой 1 см 3 1 %-ного раствора K N 0 3 и тщательно перемешивают. За­ тем в пробирку приливают пипеткой 1 см 3 1 %-ного раствора глюкозы в качестве донора водорода и перемешивают. После этого пробирку помещают в анаэростат, медленно откачивают воздух из анаэростата при разрежении 10 - 12 мм рт. ст. и помещают анаэростат с пробирками в термостат при темпера­ туре 30 °С на 24 часа. В качестве контроля используют стерилизованную при температуре 180 °С в течение 3 часов почву и почву с водой без субстра­ та (контроль на почвенные нитраты). После инкубации в термостате суспензию из пробирок переносят не­ сколькими порциями дистиллированной воды в мерную колбу емкостью 101