NED354493NED

На активность ферментов в почве влияют различные факторы, одни из которых ингибируют, а другие активизируют их действие. Активность ферментов в почве зависит от ее температуры, кислотности (pH), засоленно­ сти, карбонатности, внесения удобрений, окультуренности и других факто­ ров. Активность различных ферментов под влиянием этих факторов изменяется в разной степени. Инактивация ферментов происходит тем быст­ рее, чем больше температура и pH почвы отличаются от оптимальных интер­ валов величин их, при которых определенные ферменты проявляют наибольшую активность и устойчивость. Активность фермента выражается в единицах ферментативного дей­ ствия, что отражает количественные изменения, производимые ферментом в субстрате в определенный отрезок времени при строго определенных услови­ ях - концентрации субстрата, pH, температуры и т. д. 11.6.1. Подготовка почвы для определения ферментов Для определения ферментов в сухой почве почвенные образцы высу­ шивают до воздушно-сухого состояния, тщательно очищают от корней и про­ сеивают через сито с диаметром отверстий 0,25 мм. Для определения ферментов в свежих образцах почву измельчают, тщательно очищают от корней, просеивают через сито с диаметром отвер­ стий 0,25 мм и сразу берут пробы на анализ. 11.6.2. Определение активности дегидрогеназы (Субстрат: НАД(Ф) - оксидоредуктаза, КФ 1.1.1) Принцип метода. Дегидрогеназы катализируют дегидрирование ор­ ганических веществ и выполняют роль промежуточных переносчиков водо­ рода. Субстратами дегидрирования являются углеводы, органичские кислоты, аминокислоты, гуминовые кислоты и т. д. Отщепляемый в процессе дегидрирования водород может передаваться кислороду воздуха (аэробные дегидрогеназы) или органическим веществам типа хинонов (анаэробные де­ гидрогеназы). Активность дегидрогеназ рассматривают как показатель жиз­ недеятельности микроорганизмов и количества гумусовых веществ, которые могут различаться микроорганизмами. При определении активности дегидрогеназ в качестве акцептора во­ дорода применяют соль 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ). При этом бесцветные соли ТТХ восстанавливаются в красные соединения трифе- нилформазона (ТФФ). Ход анализа. Навеску просеянной воздушно-сухой почвы массой 1,0 г помещают в вакуумную колбу объемом 50 см 3 с притертой стеклянной проб­ кой, затем добавляют 10 мг СаСОз и тщательно перемешивают. После этого в колбу приливают 1 см 3 10 %-ного раствора глюкозы и 1 см 3 1 %-ного раство­ ра ТТХ. Определение проводится в анаэробных условиях, для чего воздух из колбы эвакуируют при разрежении 10-12 мм рт. ст. в течение 2-3 минут. Колбу осторожно встряхивают и ставят в термостат при температуре 37 °С на 24 часа. Контролем служит стерилизованная при 180 °С в течение 3 100