ЭлБиб

Секция 4: ’Ветеринарно-санитарная, гигиеническая и биологическая безопасность сырья и

продуктов биотехнологии

Генетическая иммунизация (ДНК-вакцины) представляет собой принципиально

новый подход в создании профилактических препаратов. В основе ДНК вакцинации

лежит генетическая иммунизация рекомбинантной плазмидой, несущей ген,

кодирующий антигенные эпитопы. Иммунизация ДНК-вакцинами приводит к развитию

иммунного ответа, исключая развитие инфекционного процесса. Синтезируемый

белковый

продукт

презентируется

молекулами

главного

комплекса

гистосовместимости первого и второго классов, способствующих индукции клеточного

и гуморального ответа.

Для увеличения количества клеток, экспрессирующих протективный белок,

необходимо либо увеличивать количество вводимой ДНК, что неминуемо приводит к

увеличению себестоимости препарата, либо использовать более эффективную систему

доставки генов в клетки. Этой системой могут служить рекомбинантные вирусы. В

качестве вектора для доставки генов основных протективных белков ССЯ-76 фибера и

гексона, мы используем аденовирус птиц семейства FAV-1 CELO. Данный вирус не

вызывает острой инфекции у взрослых кур и, как было показано группой ученых под

руководством М. Cotten, имеет несущественную для репликации область на правом

конце генома, в которую возможно встраивание экспрессирующих кассет. Кроме того,

CELO способен расти в куриных эмбрионах, что облегчает процесс его наращивания.

Рекомбинантные вирусы на основе CELO применимы как для генетической

вакцинации, так и для наращивания рекомбинантных белков в куриных эмбрионах.

Для получения рекомбинантного вируса была сконструирована плазмида,

несущая часть генома вируса CELO от 88,8 ед. карты до 100 ед. карты, в которой была

сделана делеция от 95,3 до 99,7 ед. карты. В данную делецию клонировали

экспрессирующие кассеты фибера ССЯ и гексона ССЯ под контолем промотора ранней

области цитомегаловируса (CMV-промотора) и сигнала полиаденилирования гормона

роста крупного рогатого скота. Таким образом, получены 2 плазмиды, содержащие

правый конец генома CELO со вставкой экспрессирующих кассет фибера и гексона

ССЯ-76. Следующим этапом работы была детекция экспрессии белков фибера и

гексона в полученных плазмидах. Клетки 293 линии (клетки эмбриональной почки

человека) трансфецировали полученными рекомбинантными плазмидами. В лизате 3-х

дневной культуры методами ИФА (ELISA) и Иммуноблота (Western Blot) была

показана экспрессия белков фибера и гексона.

В дальнейшем планируется получение рекомбинантного вируса CELO методом

котрансфекции полеченных рекомбинантных плазмид и вирусного генома на

пермиссивной культуре клеток.

СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ ИММУНОГЕНЕЗА У МЕЛКИХ ДОМАШНИХ

ЖИВОТНЫХ В ПЕРИОД РЕПАРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ

Ю.А. Ватников

Московский государственный университет прикладной биотехнологии

(Россия)

Современные методы лечения переломов направлены главным образом на

выполнение механических принципов лечения переломов - репозиция и фиксация

костных отломков. Как показывает практика, этого недостаточно. На сегодняшний

день в ветеринарной травматологии главной задачей лечения переломов следует

считать не только совершенствование методов механики остеосинтеза, но и средств

255

Электронная Научная Сель коХозяйственная Библиотека